| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 绪论 | 第14-30页 |
| 1.1 引言 | 第14页 |
| 1.2 细胞周期基本调节机制 | 第14-21页 |
| 1.2.1 细胞周期蛋白依赖性激酶 | 第14-15页 |
| 1.2.2 细胞周期蛋白 | 第15-16页 |
| 1.2.3 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子 | 第16-17页 |
| 1.2.4 细胞周期蛋白依赖性激酶磷酸化 | 第17-18页 |
| 1.2.5 蛋白降解 | 第18-19页 |
| 1.2.6 转录控制 | 第19-20页 |
| 1.2.7 E2F-Rb途径 | 第20-21页 |
| 1.2.8 核内周期 | 第21页 |
| 1.3 细胞周期与细胞生长的关系 | 第21-23页 |
| 1.3.1 单细胞内协调作用 | 第21-22页 |
| 1.3.2 跨细胞生长协调作用 | 第22页 |
| 1.3.3 细胞周期与细胞生长发育调控 | 第22-23页 |
| 1.4 植物D类周期蛋白研究进展 | 第23-27页 |
| 1.4.1 植物CYCD分类与结构 | 第23页 |
| 1.4.2 植物CYCD修饰方式 | 第23-24页 |
| 1.4.3 植物CYCD表达特征 | 第24-26页 |
| 1.4.4 植物CYCD生物学功能 | 第26-27页 |
| 1.5 植物周期蛋白研究趋势 | 第27页 |
| 1.6 本研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 1.7 研究内容与技术路线 | 第28-30页 |
| 2 PsnCYCD1;1基因功能验证 | 第30-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第30页 |
| 2.1.3 分子试剂与化学药品 | 第30-31页 |
| 2.1.4 常规药品及培养基制备 | 第31-32页 |
| 2.1.5 引物合成与测序 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-42页 |
| 2.2.1 小黑杨PsnCYCD1;1基因获得 | 第32-34页 |
| 2.2.2 组织特异性表达 | 第34-35页 |
| 2.2.3 外源物质诱导表达 | 第35页 |
| 2.2.4 启动子功能验证 | 第35-37页 |
| 2.2.5 亚细胞定位 | 第37-39页 |
| 2.2.6 细胞复制速度验证 | 第39-41页 |
| 2.2.7 细胞大小检验 | 第41-42页 |
| 2.3 结果与分析 | 第42-61页 |
| 2.3.1 PsnCYCD1;1基因克隆与分析 | 第42页 |
| 2.3.2 PsnCYCD1;1氨基酸序列同源性分析 | 第42-43页 |
| 2.3.3 PsnCYCD1;1蛋白PEST保守结构域分析 | 第43-44页 |
| 2.3.4 PsnCYCD1;1在小黑杨不同组织表达分析 | 第44-45页 |
| 2.3.5 PsnCYCD1;1对糖及不同激素应答响应分析 | 第45-46页 |
| 2.3.6 PsnCYCD1;1基因启动子表达模式 | 第46-51页 |
| 2.3.7 杨树未分化木质部瞬时转化PsnCYCD1;1亚细胞定位 | 第51-53页 |
| 2.3.8 烟草稳定遗传转化PsnCYCD1；1亚细胞定位 | 第53-55页 |
| 2.3.9 PsnCYCD1;1基因在烟草BY2悬浮细胞中对细胞增殖影响 | 第55-58页 |
| 2.3.10 PsnCYCD1;1瞬时转化影响烟草表皮细胞大小 | 第58-61页 |
| 2.4 本章小节 | 第61-62页 |
| 3 PsnCYCDl;1基因在拟南芥中功能分析 | 第62-83页 |
| 3.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第62页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第62页 |
| 3.1.3 分子试剂与化学药品 | 第62页 |
| 3.1.4 常规药品及培养基制备 | 第62-63页 |
| 3.1.5 引物合成与测序 | 第63页 |
| 3.2 实验方法 | 第63-68页 |
| 3.2.1 植物表达载体构建 | 第63-64页 |
| 3.2.2 拟南芥遗传转化 | 第64-65页 |
| 3.2.3 转基因拟南芥分子检测 | 第65-67页 |
| 3.2.4 转基因拟南芥表型分析 | 第67页 |
| 3.2.5 转基因拟南芥内源基因定量检测 | 第67-68页 |
| 3.3 结果与分析 | 第68-81页 |
| 3.3.1 植物表达载体pROKⅡ-PsnCYCD1;1-flag构建 | 第68-70页 |
| 3.3.2 pROKⅡ-PsnCYCD1;1-flag在拟南芥中遗传转化及PCR鉴定 | 第70页 |
| 3.3.3 转基因拟南芥在mRNA和蛋白水平鉴定 | 第70-71页 |
| 3.3.4 转基因拟南芥幼苗表型分析 | 第71-74页 |
| 3.3.5 转基因拟南芥幼苗根长比较分析 | 第74页 |
| 3.3.6 转基因拟南芥幼苗对激素应答处理 | 第74-75页 |
| 3.3.7 转基因拟南芥细胞大小观察 | 第75-78页 |
| 3.3.8 转基因拟南芥内源相关基因检测 | 第78-81页 |
| 3.4 本章小节 | 第81-83页 |
| 4 PsnCYCD1;1基因在小黑杨中功能分析 | 第83-118页 |
| 4.1 实验材料 | 第83-84页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第83页 |
| 4.1.2 菌株与载体 | 第83页 |
| 4.1.3 分子试剂与化学药品 | 第83页 |
| 4.1.4 常规药品及培养基制备 | 第83-84页 |
| 4.1.5 引物合成与测序 | 第84页 |
| 4.2 实验方法 | 第84-89页 |
| 4.2.1 小黑杨遗传转化 | 第84页 |
| 4.2.2 转基因小黑杨分子验证 | 第84-87页 |
| 4.2.3 转基因小黑杨表型观察 | 第87-89页 |
| 4.3 结果与分析 | 第89-116页 |
| 4.3.1 转PsnCYCD1;1基因小黑杨获得与鉴定 | 第89-97页 |
| 4.3.2 转基因小黑杨幼苗期表型分析 | 第97-100页 |
| 4.3.3 转基因小黑杨成苗期表型分析 | 第100-110页 |
| 4.3.4 转基因小黑杨愈伤组织对激素应答分析 | 第110-111页 |
| 4.3.5 转基因小黑杨内源相关基因检测 | 第111-114页 |
| 4.3.6 转基因小黑杨木质部发育与次生壁合成相关基因检测 | 第114-116页 |
| 4.4 本章小节 | 第116-118页 |
| 5 PsnCYCD1;1互作蛋白验证 | 第118-148页 |
| 5.1 实验材料 | 第118-119页 |
| 5.1.1 菌株与载体 | 第118页 |
| 5.1.2 分子试剂与化学药品 | 第118页 |
| 5.1.3 常规药品及培养基制备 | 第118-119页 |
| 5.1.4 引物合成与测序 | 第119页 |
| 5.2 实验方法 | 第119-126页 |
| 5.2.1 酵母诱饵表达载体构建 | 第119-120页 |
| 5.2.2 小黑杨PsnCDKs基因克隆与载体构建 | 第120-122页 |
| 5.2.3 小黑杨PsnICKs基因克隆与载体构建 | 第122-123页 |
| 5.2.4 自激活验证 | 第123页 |
| 5.2.5 毒性验证 | 第123页 |
| 5.2.6 蛋白互作验证 | 第123-124页 |
| 5.2.7 酵母载体互换验证 | 第124-125页 |
| 5.2.8 BiFC验证 | 第125-126页 |
| 5.3 结果与分析 | 第126-146页 |
| 5.3.1 PsnCYCD1;1基因在酵母中转录激活与毒性验证 | 第126-130页 |
| 5.3.2 酵母Prey载体pGADT7-PsnCDKs构建 | 第130-133页 |
| 5.3.3 酵母Prey载体pGADT7-PsnICKs构建 | 第133-136页 |
| 5.3.4 PsnCYCD1;1互作蛋白研究 | 第136-146页 |
| 5.4 本章小节 | 第146-148页 |
| 6 讨论与结论 | 第148-160页 |
| 6.1 讨论 | 第148-158页 |
| 6.1.1 PsnCYCD1;1家族基因特征 | 第148-149页 |
| 6.1.2 PsnCYCD1;1生物学特征 | 第149-151页 |
| 6.1.3 PsnCYCD1;1互作蛋白 | 第151-152页 |
| 6.1.4 PsnCYCD1;1与植物生长的关系 | 第152-154页 |
| 6.1.5 PsnCYCD1;1与植物发育的关系 | 第154-158页 |
| 6.2 结论 | 第158页 |
| 6.3 研究展望 | 第158-160页 |
| 参考文献 | 第160-176页 |
| 附录 | 第176-182页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第182-183页 |
| 致谢 | 第183-186页 |
| 附件 | 第186-188页 |
