| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 苯丙氨酸脱氨酶概述 | 第9页 |
| 1.2 PAL酶法治疗苯丙酮尿症（PKU）现状 | 第9-10页 |
| 1.3 PAL的结构及催化机理 | 第10-12页 |
| 1.3.1 PAL的结构 | 第10-11页 |
| 1.3.2 PAL的催化机理 | 第11-12页 |
| 1.4 提高酶活的分子改造方法 | 第12-13页 |
| 1.5 酶的最适反应pH分子改造方法 | 第13页 |
| 1.6 多孔硅材料在药物运输中的应用前景 | 第13-14页 |
| 1.7 本论文的研究意义与内容 | 第14-16页 |
| 1.7.1 立题依据及意义 | 第14页 |
| 1.7.2 主要研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-25页 |
| 2.1 材料 | 第16-20页 |
| 2.1.1 菌种、质粒和引物 | 第16-18页 |
| 2.1.2 培养基 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 分子生物学改造方法 | 第20-21页 |
| 2.2.1 突变菌株的构建 | 第20页 |
| 2.2.2 超级感受态细胞的制备（试剂盒） | 第20-21页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第21页 |
| 2.2.4 质粒提取 | 第21页 |
| 2.2.5 阳性克隆的筛选鉴定 | 第21页 |
| 2.3 AvPAL的表达和纯化方法 | 第21-22页 |
| 2.3.1 目的蛋白的诱导表达 | 第21页 |
| 2.3.2 目的蛋白的纯化 | 第21-22页 |
| 2.3.3 蛋白浓度的测定 | 第22页 |
| 2.4 AvPAL的性质分析方法 | 第22-23页 |
| 2.4.1 酶活测定 | 第22页 |
| 2.4.2 最适反应pH以及pH稳定性测定 | 第22页 |
| 2.4.3 最适反应温度以及动力学稳定性测定 | 第22-23页 |
| 2.4.4 动力学参数测定 | 第23页 |
| 2.4.5 突变体酶的结构分析 | 第23页 |
| 2.4.6 表面氨基酸的确定方法 | 第23页 |
| 2.4.7 PAL的PEG修饰 | 第23页 |
| 2.4.8 PAL在极端pH条件及胰蛋白酶环境中稳定性的测定方法 | 第23页 |
| 2.5 PAL的化学修饰及修饰酶的性质分析方法 | 第23-25页 |
| 2.5.1 硅溶胶的制备 | 第23页 |
| 2.5.2 酶颗粒的制备 | 第23-24页 |
| 2.5.3 酶颗粒的酶活回收率 | 第24页 |
| 2.5.4 酶颗粒的最适反应pH分析 | 第24页 |
| 2.5.5 酶颗粒的最适反应温度及动力学稳定性分析 | 第24页 |
| 2.5.6 酶颗粒的催化稳定性分析 | 第24页 |
| 2.5.7 酶颗粒及游离酶的稳定性分析 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-45页 |
| 3.1 Tyr78-loop对AvPAL酶活的影响 | 第25-31页 |
| 3.1.1 Tyr78-loop突变位点的确定 | 第25-26页 |
| 3.1.2 Tyr78-loop突变体的构建 | 第26页 |
| 3.1.3 Tyr78-loop突变体的筛选 | 第26-28页 |
| 3.1.5 Tyr78-loop突变酶的最适反应pH及pH稳定性 | 第28-29页 |
| 3.1.6 Tyr78-loop突变酶的最适反应温度及动力学稳定性 | 第29-30页 |
| 3.1.7 Tyr78-loop突变酶的动力学参数 | 第30页 |
| 3.1.8 Tyr78-loop突变酶的最适反应温度及动力学稳定性 | 第30-31页 |
| 3.2 AvPAL的最适反应pH分子改造 | 第31-39页 |
| 3.2.1 最适pH改造突变位点选择及突变体构建 | 第32页 |
| 3.2.2 最适pH改造突变酶的pH-活力曲线 | 第32-34页 |
| 3.2.3 最适pH改造突变酶的pH稳定性 | 第34-35页 |
| 3.2.4 最适pH改造突变酶的最适反应温度以及动力学稳定性 | 第35-36页 |
| 3.2.5 最适pH改造突变酶的动力学参数 | 第36页 |
| 3.2.6 PEG修饰对突变酶最适反应pH的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.7 最适pH改造突变酶在极端pH以及胰蛋白酶溶液中的稳定性 | 第37-38页 |
| 3.2.8 最适pH改造突变酶稳定性提高的结构分析 | 第38-39页 |
| 3.3 硅溶胶-凝胶方法包埋对AvPAL稳定性的影响 | 第39-45页 |
| 3.3.1 AvPAL酶颗粒的物理性质 | 第39-40页 |
| 3.3.2 AvPAL酶颗粒的酶活回收率 | 第40页 |
| 3.3.3 AvPAL酶颗粒的最适反应pH | 第40-41页 |
| 3.3.4 AvPAL酶颗粒的最适反应温度及动力学稳定性 | 第41-42页 |
| 3.3.5 AvPAL酶颗粒的催化稳定性 | 第42页 |
| 3.3.6 AvPAL酶颗粒及游离酶的稳定性比较 | 第42-43页 |
| 3.3.7 原酶和突变体酶的酶颗粒稳定性比较 | 第43-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-46页 |
| 主要结论 | 第45页 |
| 展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
