| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第15-26页 |
| 1.1 壳聚糖与壳寡糖概述 | 第15-16页 |
| 1.2 壳寡糖的生理活性及其应用 | 第16-18页 |
| 1.2.1 抑制细菌生长 | 第16页 |
| 1.2.2 抑制癌细胞 | 第16-17页 |
| 1.2.3 降低血脂 | 第17页 |
| 1.2.4 抗氧化能力 | 第17-18页 |
| 1.2.5 植物免疫激活因子 | 第18页 |
| 1.3 壳寡糖的应用 | 第18-19页 |
| 1.3.1 食品工业 | 第18页 |
| 1.3.2 医药化工 | 第18-19页 |
| 1.4 壳寡糖的生产 | 第19-20页 |
| 1.4.1 化学法 | 第19页 |
| 1.4.2 物理法 | 第19页 |
| 1.4.3 生物法 | 第19-20页 |
| 1.5 海洋微生物 | 第20页 |
| 1.6 壳聚糖酶 | 第20-21页 |
| 1.7 产壳聚糖酶微生物 | 第21-22页 |
| 1.8 壳聚糖酶活力的测定 | 第22-23页 |
| 1.9 本课题的研究背景及其意义 | 第23-24页 |
| 1.9.1 研究背景 | 第23页 |
| 1.9.2 研究意义 | 第23-24页 |
| 1.10 本课题的实验路线 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-42页 |
| 2.1 主要仪器及设备 | 第26页 |
| 2.2 使用的菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 2.3 常用的药品和酶制剂 | 第27页 |
| 2.4 培养基及试剂的配置 | 第27-30页 |
| 2.5 环境样品的采集和处理 | 第30页 |
| 2.6 产壳聚糖酶菌株的筛选 | 第30页 |
| 2.6.1 富集培养 | 第30页 |
| 2.6.2 平板初次筛选 | 第30页 |
| 2.6.3 摇瓶复筛 | 第30页 |
| 2.7 发酵液酶活力的测定 | 第30-31页 |
| 2.7.1 盐酸氨基葡萄糖标准曲线的绘制 | 第30-31页 |
| 2.7.2 粗酶液活力的测定 | 第31页 |
| 2.7.3 粗酶液最适反应温度的测定 | 第31页 |
| 2.7.4 粗酶液最适反应pH的测定 | 第31页 |
| 2.8 菌株的生理生化性质鉴定 | 第31-34页 |
| 2.8.1 革兰氏染色 | 第32页 |
| 2.8.2 芽孢染色 | 第32页 |
| 2.8.3 细菌菌落形态观察 | 第32页 |
| 2.8.4 细菌运动性观察 | 第32页 |
| 2.8.5 氧化酶试验 | 第32-33页 |
| 2.8.6 接触酶试验 | 第33页 |
| 2.8.7 硝酸盐还原试验 | 第33页 |
| 2.8.8 淀粉水解试验 | 第33页 |
| 2.8.9 NaCl生长试验 | 第33页 |
| 2.8.10 丙酸盐利用试验 | 第33页 |
| 2.8.11 糖发酵试验 | 第33-34页 |
| 2.8.12 pH5.7生长试验 | 第34页 |
| 2.8.13 厌氧生长试验 | 第34页 |
| 2.8.14 吲哚试验 | 第34页 |
| 2.8.15 碳源利用 | 第34页 |
| 2.8.16 氮源利用 | 第34页 |
| 2.9 菌株的分子生物学鉴定 | 第34-39页 |
| 2.9.1 细菌基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.9.2 细菌16S rDNA的扩增 | 第35-37页 |
| 2.9.3 TA克隆 | 第37页 |
| 2.9.4 化学转化法大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备与转化 | 第37-38页 |
| 2.9.5 质粒的提取 | 第38-39页 |
| 2.9.6 菌株16S rDNA基因进化树的构建 | 第39页 |
| 2.10 菌株发酵条件的优化 | 第39-41页 |
| 2.10.1 菌株的初始产酶曲线 | 第39页 |
| 2.10.2 不同氮源对菌株发酵产酶的影响 | 第39-40页 |
| 2.10.3 不同碳源对菌株发酵产酶的影响 | 第40页 |
| 2.10.4 不同氮源浓度对菌株发酵产酶的影响 | 第40页 |
| 2.10.5 不同碳源浓度对菌株发酵产酶的影响 | 第40页 |
| 2.10.6 pH对菌株发酵产酶的影响 | 第40页 |
| 2.10.7 装液量对菌株发酵产酶的影响 | 第40页 |
| 2.10.8 培养转速对菌株发酵产酶的影响 | 第40-41页 |
| 2.10.9 培养温度对菌株发酵产酶的影响 | 第41页 |
| 2.10.10 培养基壳聚糖浓度对菌株产酶的影响 | 第41页 |
| 2.10.11 正交试验 | 第41页 |
| 2.11 最适条件下菌株的生长曲线 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第42-61页 |
| 3.1 产壳聚糖酶菌株的筛选 | 第42-43页 |
| 3.1.1 平板初次筛选 | 第42-43页 |
| 3.1.2 摇瓶复筛 | 第43页 |
| 3.2 酶活力的测定 | 第43-46页 |
| 3.2.1 标准曲线的绘制 | 第43-44页 |
| 3.2.2 粗酶液的最适反应温度 | 第44-45页 |
| 3.2.3 粗酶液的最适反应pH值 | 第45-46页 |
| 3.3 菌株的常规生理生化性质鉴定结果 | 第46-49页 |
| 3.3.1 菌株的形态特征 | 第46-47页 |
| 3.3.2 菌株的生理生化性质 | 第47-49页 |
| 3.4 菌株分子生物学鉴定结果 | 第49-52页 |
| 3.4.1 细菌基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| 3.4.2 16S rDNA的扩增 | 第50-51页 |
| 3.4.3 16S rDNA的测序 | 第51页 |
| 3.4.4 菌株GZ1 16S rDNA序列进化树的构建 | 第51-52页 |
| 3.5 单因素实验结果 | 第52-58页 |
| 3.5.1 初始产酶曲线的测定 | 第52-53页 |
| 3.5.2 不同氮源对发酵液酶活力的影响 | 第53-54页 |
| 3.5.3 不同碳源对发酵液酶活力的影响 | 第54-55页 |
| 3.5.4 氮源浓度对发酵液酶活力的影响 | 第55页 |
| 3.5.5 碳源浓度对发酵液酶活力的影响 | 第55-56页 |
| 3.5.6 pH值对发酵液酶活力的影响 | 第56页 |
| 3.5.7 装液量对发酵液酶活力的影响 | 第56-57页 |
| 3.5.8 培养转速对发酵液酶活力的影响 | 第57页 |
| 3.5.9 培养温度对发酵液酶活力的影响 | 第57-58页 |
| 3.5.10 壳聚糖浓度对发酵液酶活力的影响 | 第58页 |
| 3.6 正交实验结果 | 第58-60页 |
| 3.7 在最适发酵条件下菌株的生长曲线 | 第60-61页 |
| 第四章 总结与展望 | 第61-66页 |
| 4.1 总结 | 第61-65页 |
| 4.1.1 海洋产壳聚糖酶菌株的筛选 | 第61-62页 |
| 4.1.2 菌株的鉴定 | 第62-63页 |
| 4.1.3 酶活力测定 | 第63页 |
| 4.1.4 发酵条件的优化 | 第63-65页 |
| 4.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 硕士阶段发表论文情况 | 第78页 |