| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 前言 | 第9-15页 |
| 1.1 先天免疫系统 | 第9-12页 |
| 1.1.1 外部屏障 | 第9-10页 |
| 1.1.2 体液免疫 | 第10-12页 |
| 1.1.2.1 溶菌酶 | 第10页 |
| 1.1.2.2 抗菌肽 | 第10页 |
| 1.1.2.3 补体系统 | 第10-11页 |
| 1.1.2.4 细胞因子 | 第11-12页 |
| 1.1.2.4.1 干扰素 | 第11-12页 |
| 1.1.2.4.2 白细胞介素 | 第12页 |
| 1.2 鱼类I型干扰素抗病毒机理 | 第12页 |
| 1.3 干扰素的作用及其临床应用 | 第12-13页 |
| 1.4 鲫鱼养殖现状 | 第13-14页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 1.5.1 本研究的目的 | 第14页 |
| 1.5.2 本研究的意义 | 第14-15页 |
| 第二章 材料和方法 | 第15-30页 |
| 2.1 仪器和试剂 | 第15-18页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第15-16页 |
| 2.1.2 主要试剂盒 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 载体和菌株 | 第17页 |
| 2.1.5 引物 | 第17页 |
| 2.1.6 相关生物软件 | 第17-18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18页 |
| 2.3 实验方法 | 第18-30页 |
| 2.3.1 pBV220-CiIFN重组质粒的构建 | 第18-21页 |
| 2.3.1.1 草鱼IFN(CiIFN)基因的特异扩增 | 第18-19页 |
| 2.3.1.2 pBV220-CiIFN载体的构建 | 第19-21页 |
| 2.3.2 重组草鱼干扰素(rCiIFN)的原核表达 | 第21-22页 |
| 2.3.2.1 rCiIFN原核表达的小量验证 | 第21页 |
| 2.3.2.2 确定rCiIFN原核表达最佳诱导时间 | 第21-22页 |
| 2.3.2.3 rCiIFN原核表达的大量表达 | 第22页 |
| 2.3.3 rCiIFN原核表达产物的纯化及其浓度测定 | 第22-24页 |
| 2.3.3.1 rCiIFN原核表达产物的纯化 | 第22-23页 |
| 2.3.3.2 rCiIFN蛋白质浓度的测定 | 第23-24页 |
| 2.3.4 Western Blot验证rCiIFN蛋白 | 第24-25页 |
| 2.3.5 rCiIFN蛋白对鲫鱼的免疫保护 | 第25-26页 |
| 2.3.6 rCiIFN对鲫鱼PKR的诱导表达 | 第26-28页 |
| 2.3.6.1 鲫鱼各组织总RNA提取 | 第26页 |
| 2.3.6.2 总RNA完整性与纯度的检测 | 第26-27页 |
| 2.3.6.3 cDNA的制备 | 第27页 |
| 2.3.6.4 反转录效果的检测 | 第27-28页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR检测鲫鱼IFN和PKR基因的组织表达水平 | 第28-30页 |
| 第三章 结果与分析 | 第30-38页 |
| 3.1 pBV220-CiIFN重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| 3.1.1 草鱼IFN(CiIFN)基因的特异性扩增及其纯化 | 第30页 |
| 3.1.2 pBV220-CiIFN载体的构建 | 第30-31页 |
| 3.1.3 pBV220-CiIFN重组质粒的提取及转化到大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞 | 第31页 |
| 3.2 重组草鱼干扰素(rCiIFN)的原核表达及纯化鉴定 | 第31-33页 |
| 3.2.1 rCiIFN原核表达 | 第31-32页 |
| 3.2.2 rCiIFN的纯化及其鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.3 rCiIFN蛋白浓度的测定 | 第33页 |
| 3.3 rCiIFN蛋白对鲫鱼的免疫保护 | 第33-34页 |
| 3.4 rCiIFN对鲫鱼PKR诱导表达分析 | 第34-38页 |
| 3.4.1 鲫鱼各组织总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 3.4.2 反转录效果的检测 | 第35-36页 |
| 3.4.3 实时荧光定量PCR检测鲫鱼IFN和PKR基因的组织表达水平 | 第36-38页 |
| 第四章 讨论 | 第38-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
