英文缩略词 | 第4-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
1 前言 | 第11-21页 |
1.1 日本沼虾的种质特性研究进展 | 第11-12页 |
1.2 日本沼虾免疫系统研究进展 | 第12-15页 |
1.2.1 酚氧化酶原激活系统研究进展 | 第13页 |
1.2.2 凝集素研究进展 | 第13-14页 |
1.2.3 溶菌酶研究进展 | 第14页 |
1.2.4 血蓝蛋白研究进展 | 第14-15页 |
1.2.5 抗菌肽研究进展 | 第15页 |
1.3 酚氧化酶原系统研究进展 | 第15-17页 |
1.3.1 酚氧化酶原和酚氧化酶 | 第15-16页 |
1.3.2 酚氧化酶原激活因子 | 第16-17页 |
1.4 分子细胞生物学技术及其应用 | 第17-20页 |
1.4.1 快速克隆cDNA末端技术(Rapid Amplification of cDNA Ends, RACE) | 第17-18页 |
1.4.2 巢式PCR(NEST-PCR)和降落PCR(TOUCH DOWN PCR) | 第18-19页 |
1.4.3 实时荧光定量PCR(REAL TIME QUANTIATIVE PCR) | 第19-20页 |
1.5 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
2 材料与方法 | 第21-30页 |
2.1 试验材料 | 第21-23页 |
2.1.1 试验动物 | 第21页 |
2.1.2 嗜水气单胞菌 | 第21页 |
2.1.3 主要仪器设备 | 第21-22页 |
2.1.4 主要试剂 | 第22页 |
2.1.5 常用溶液配制 | 第22-23页 |
2.2 试验方法 | 第23-30页 |
2.2.1 引物合成 | 第23页 |
2.2.2 总RNA的提取与质量检测 | 第23-24页 |
2.2.3 反转录合成cDNA | 第24页 |
2.2.4 RACE扩增目的基因全长cDNA序列 | 第24-26页 |
2.2.5 日本沼虾PPAF基因序列扩增 | 第26页 |
2.2.6 PCR产物片段回收 | 第26-27页 |
2.2.7 PCR产物与载体的连接 | 第27页 |
2.2.8 大肠杆菌的转化 | 第27-28页 |
2.2.9 重组克隆的鉴定 | 第28页 |
2.2.10 生物信息学分析 | 第28页 |
2.2.11 人工感染日本沼虾试验 | 第28页 |
2.2.12 荧光定量PCR | 第28-30页 |
3 结果与分析 | 第30-39页 |
3.1 总RNA的提取 | 第30页 |
3.2 PPAF基因的分离鉴定与生物信息学分析 | 第30-31页 |
3.2.1 日本沼虾PPAF基因cDNA的扩增、分离与鉴定 | 第30-31页 |
3.2.2 日本沼虾PPAF基因的快速扩增、分离与鉴定 | 第31页 |
3.3 日本沼虾PPAF基因的获得与序列分析 | 第31-33页 |
3.4 PPAF基因氨基酸序列的功能分析 | 第33-35页 |
3.5 日本沼虾PPAF基因的mRNA表达分析 | 第35-39页 |
4 讨论 | 第39-42页 |
4.1 日本沼虾PPAF基因的分子克隆与序列分析 | 第39-40页 |
4.2 日本沼虾PPAF基因的定量表达 | 第40-42页 |
5 结论 | 第42-43页 |
参考文献 | 第43-52页 |
致谢 | 第52页 |