| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-27页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 富马酸概述 | 第10-14页 |
| 1.2.1 富马酸理化性质及主要用途 | 第10-12页 |
| 1.2.2 富马酸生产方法 | 第12-14页 |
| 1.3 合成生物学 | 第14-19页 |
| 1.3.1 合成生物学定义 | 第14页 |
| 1.3.2 合成生物学研究内容 | 第14-19页 |
| 1.4 合成生物学应用于富马酸生产研究进展 | 第19-22页 |
| 1.4.1 富马酸合成途径 | 第19-20页 |
| 1.4.2 富马酸合成菌株 | 第20-22页 |
| 1.5 木质纤维素生物质的利用 | 第22-24页 |
| 1.5.1 木质纤维素 | 第22页 |
| 1.5.2 木糖发酵菌株 | 第22-23页 |
| 1.5.3 树干毕赤酵母研究进展 | 第23-24页 |
| 1.6 本课题的研究意义和研究内容 | 第24-27页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第24-25页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 树干毕赤酵母初始合成菌株利用木糖生产富马酸 | 第27-57页 |
| 2.1 引言 | 第27-28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-36页 |
| 2.2.1 菌种、质粒及引物 | 第28-31页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第31-34页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第34-35页 |
| 2.2.4 培养基 | 第35-36页 |
| 2.2.5 主要溶液 | 第36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-44页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第36-37页 |
| 2.3.2 大肠杆菌质粒DNA提取方法 | 第37-38页 |
| 2.3.3 树干毕赤酵母感受态细胞制备及转化 | 第38页 |
| 2.3.4 酵母基因组提取方法 | 第38-39页 |
| 2.3.5 重组质粒构建方法 | 第39-41页 |
| 2.3.6 总RNA提取 | 第41-42页 |
| 2.3.7 树干毕赤酵母培养方法 | 第42页 |
| 2.3.8 发酵参数测定 | 第42-43页 |
| 2.3.9 引物设计及基因合成 | 第43-44页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第44-55页 |
| 2.4.1 尿嘧啶和亮氨酸营养缺陷型 | 第44-49页 |
| 2.4.2 树干毕赤酵母富马酸合成菌株构建方法 | 第49-53页 |
| 2.4.3 S.stipitis富马酸初始合成菌株木糖发酵动力学分析 | 第53-55页 |
| 2.4.4 S.stipitis初始合成菌株富马酸生产理性分析 | 第55页 |
| 2.5 小结 | 第55-57页 |
| 第三章 理性优化下S. stipitis合成菌株木糖高效发酵富马酸 | 第57-73页 |
| 3.1 引言 | 第57-58页 |
| 3.2 实验材料 | 第58-61页 |
| 3.2.1 菌种、质粒及引物 | 第58-61页 |
| 3.2.2 试剂和仪器 | 第61页 |
| 3.3 实验方法 | 第61-64页 |
| 3.3.1 RT-PCR | 第61-63页 |
| 3.3.2 酶活测定 | 第63-64页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第64-71页 |
| 3.4.1 密码子优化提高富马酸还原途径活性 | 第64-66页 |
| 3.4.2 敲除自身富马酸酶减少富马酸消耗 | 第66-69页 |
| 3.4.3 异源表达高效富马酸转运蛋白增强转运能力 | 第69-71页 |
| 3.5 理性优化下木糖代谢富马酸合成菌株强化 | 第71-72页 |
| 3.6 小结 | 第72-73页 |
| 第四章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 4.1 主要结论 | 第73页 |
| 4.2 创新点 | 第73-74页 |
| 4.3 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第82-83页 |
| 附录 | 第83-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
