| 摘要 | 第5-8页 |
| abstract | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-33页 |
| 1.1 草鱼出血病研究概况 | 第17-18页 |
| 1.2 草鱼出血病流行病学研究 | 第18页 |
| 1.3 草鱼呼肠孤病毒（GCRV）生物学研究 | 第18-20页 |
| 1.3.1 GCRV形态特征 | 第18页 |
| 1.3.2 GCRV理化特征 | 第18-19页 |
| 1.3.3 GCRV细胞培养和感染特征 | 第19页 |
| 1.3.4 GCRV基因组特征 | 第19-20页 |
| 1.3.5 GCRV基因组转录与翻译 | 第20页 |
| 1.4 草鱼呼肠孤病毒（GCRV）的检测 | 第20页 |
| 1.5 草鱼出血病防治方法研究进展 | 第20-23页 |
| 1.5.1 草鱼出血病生态防治 | 第20-21页 |
| 1.5.2 草鱼出血病药物防控 | 第21页 |
| 1.5.3 RNA干扰技术预防草鱼出血病 | 第21-22页 |
| 1.5.4 草鱼出血病疫苗防治 | 第22-23页 |
| 1.6 疫苗免疫途径研究进展 | 第23-24页 |
| 1.6.1 注射免疫途径 | 第23页 |
| 1.6.2 口服免疫途径 | 第23页 |
| 1.6.3 浸泡免疫途径 | 第23-24页 |
| 1.7 菌蜕研究进展 | 第24-28页 |
| 1.7.1 菌蜕形成机制 | 第25页 |
| 1.7.2 菌蜕疫苗免疫效果研究 | 第25-26页 |
| 1.7.3 菌蜕作为药物载体研究 | 第26页 |
| 1.7.4 菌蜕作为抗原载体研究 | 第26-27页 |
| 1.7.5 菌蜕作为DNA载体研究 | 第27-28页 |
| 1.8 细菌表面展示研究进展 | 第28-31页 |
| 1.8.1 细菌表面展示系统简介 | 第28-29页 |
| 1.8.2 细菌表面展示在疫苗开发中的应用 | 第29-30页 |
| 1.8.3 基于冰核蛋白的细菌表面展示研究 | 第30-31页 |
| 1.8.4 基于冰核蛋白的细菌表面展示在疫苗开发中的应用 | 第31页 |
| 1.9 选题的目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 大肠杆菌菌蜕载GCRV vp7核酸疫苗构建 | 第33-53页 |
| 2.1 材料与方法 | 第33-41页 |
| 2.1.1 试验动物和病毒 | 第33-34页 |
| 2.1.2 细菌和质粒 | 第34页 |
| 2.1.3 pCAT-lysisE/SNA/Smap29重组质粒构建 | 第34-36页 |
| 2.1.4 pCAT-lysisE/SNA/Smap29重组质粒表达 | 第36页 |
| 2.1.5 大肠杆菌DH5α菌蜕扫描电镜检测 | 第36-37页 |
| 2.1.6 大肠杆菌DH5α菌蜕载vp7核酸疫苗构建 | 第37页 |
| 2.1.7 大肠杆菌DH5α菌蜕载vp7核酸疫苗装载效果检测 | 第37-38页 |
| 2.1.8 疫苗免疫和攻毒试验 | 第38页 |
| 2.1.9 不同组织中pcDNA-vp7检测 | 第38-39页 |
| 2.1.10 肌肉组织中pcDNA-vp7表达检测 | 第39页 |
| 2.1.11 草鱼血清抗体免疫效价测定 | 第39页 |
| 2.1.12 免疫相关生理指标检测 | 第39页 |
| 2.1.13 免疫相关基因表达测定 | 第39-41页 |
| 2.2 结果与分析 | 第41-51页 |
| 2.2.1 pCAT-lysisE/SNA/Smap29重组质粒构建结果 | 第41-42页 |
| 2.2.2 pCAT-lysisE/SNA/Smap29重组质粒诱导表达结果 | 第42-43页 |
| 2.2.3 大肠杆菌DH5α菌蜕扫描电镜检测 | 第43页 |
| 2.2.4 大肠杆菌菌蜕载核酸疫苗装载效果分析 | 第43-44页 |
| 2.2.5 不同组织中pcDNA-vp7检测结果 | 第44-45页 |
| 2.2.6 肾脏组织中pcDNA-vp7表达检测结果 | 第45-46页 |
| 2.2.7 草鱼血清抗体效价测定结果 | 第46页 |
| 2.2.8 免疫相关生理指标测定结果 | 第46-48页 |
| 2.2.9 免疫相关基因检测结果 | 第48-49页 |
| 2.2.10 免疫保护效果 | 第49-51页 |
| 2.3 讨论 | 第51-52页 |
| 2.4 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 大肠杆菌表面展示VP7蛋白疫苗构建 | 第53-69页 |
| 3.1 材料与方法 | 第53-58页 |
| 3.1.1 试验动物和病毒 | 第53页 |
| 3.1.2 细菌和质粒 | 第53页 |
| 3.1.3 重组pET28a-InpN/vp7质粒构建 | 第53-55页 |
| 3.1.4 重组蛋白诱导表达 | 第55页 |
| 3.1.5 包涵体检测 | 第55页 |
| 3.1.6 细胞组分分离 | 第55-56页 |
| 3.1.7 免疫荧光检测 | 第56页 |
| 3.1.8 重组菌VP7蛋白表达量测定 | 第56-57页 |
| 3.1.9 草鱼免疫实验 | 第57页 |
| 3.1.10 抗体效价测定 | 第57页 |
| 3.1.11 免疫相关生理指标测定 | 第57页 |
| 3.1.12 免疫相关基因表达测定 | 第57-58页 |
| 3.1.13 GCRV攻毒试验 | 第58页 |
| 3.2 结果与分析 | 第58-67页 |
| 3.2.1 pET28a-InpN/vp7重组质粒构建结果 | 第58页 |
| 3.2.2 重组蛋白表达检测结果 | 第58-59页 |
| 3.2.3 包涵体检测结果 | 第59-60页 |
| 3.2.4 细胞组分超速离心分离检测结果 | 第60页 |
| 3.2.5 免疫荧光检测结果 | 第60-61页 |
| 3.2.6 重组菌VP7蛋白表达量测定结果 | 第61页 |
| 3.2.7 抗体效价测定结果 | 第61-62页 |
| 3.2.8 免疫相关生理指标测定结果 | 第62-65页 |
| 3.2.9 免疫相关基因检测结果 | 第65-66页 |
| 3.2.10 免疫保护效果 | 第66-67页 |
| 3.3 讨论 | 第67-68页 |
| 3.4 小结 | 第68-69页 |
| 第四章 大肠杆菌表面共展示vp7-OmpA和vp7-Mah蛋白疫苗构建 | 第69-92页 |
| 4.1 材料与方法 | 第70-74页 |
| 4.1.1 试验动物和病毒 | 第70页 |
| 4.1.2 细菌和质粒 | 第70-71页 |
| 4.1.3 重组pET28a-InpN/vp7-OmpA质粒构建 | 第71页 |
| 4.1.4 重组pET28a-InpN/vp7-Mah质粒构建 | 第71-72页 |
| 4.1.5 重组蛋白诱导表达 | 第72页 |
| 4.1.6 包涵体检测 | 第72页 |
| 4.1.7 细胞组分分离 | 第72-73页 |
| 4.1.8 免疫荧光检测 | 第73页 |
| 4.1.9 重组菌中VP7蛋白表达量测定 | 第73页 |
| 4.1.10 草鱼免疫实验 | 第73页 |
| 4.1.11 抗体效价测定 | 第73页 |
| 4.1.12 免疫相关生理指标测定 | 第73页 |
| 4.1.13 免疫相关基因表达测定 | 第73页 |
| 4.1.14 GCRV攻毒试验 | 第73-74页 |
| 4.2 结果与分析 | 第74-90页 |
| 4.2.1 重组质粒构建结果 | 第74页 |
| 4.2.2 重组蛋白表达检测结果 | 第74-76页 |
| 4.2.3 包涵体检测结果 | 第76页 |
| 4.2.4 细胞组分超速离心分离检测结果 | 第76-77页 |
| 4.2.5 免疫荧光检测结果 | 第77页 |
| 4.2.6 重组菌VP7蛋白表达量测定结果 | 第77-79页 |
| 4.2.7 草鱼血清抗体效价测定结果 | 第79-80页 |
| 4.2.8 免疫相关生理指标测定结果 | 第80-83页 |
| 4.2.9 草鱼免疫相关基因检测结果 | 第83-88页 |
| 4.2.10 免疫保护效果评价 | 第88-90页 |
| 4.3 讨论 | 第90-91页 |
| 4.4 小结 | 第91-92页 |
| 第五章 大肠杆菌表面共展示vp7-Mah侵染机制初步研究 | 第92-103页 |
| 5.1 材料与方法 | 第92-95页 |
| 5.1.1 细胞和细菌 | 第92页 |
| 5.1.2 BL21/InpN/vp7-Mah粘附和侵染试验 | 第92-93页 |
| 5.1.3 不同胞吞抑制剂对BL21/InpN/vp7-Mah侵染EPC细胞的影响 | 第93页 |
| 5.1.4 BL21/InpN/vp7-Mah侵染对EPC细胞F-肌动蛋白（F-actin）的影响 | 第93-94页 |
| 5.1.5 细胞松弛素D对BL21/InpN/vp7-Mah侵染EPC细胞的影响 | 第94页 |
| 5.1.6 BL21/InpN/vp7-Mah侵染对EPC细胞p38激酶和HSP27磷酸化的影响 | 第94-95页 |
| 5.1.7 p38 激酶抑制剂对 BL21/Inp N/vp7-Mah 侵染 EPC 细胞的影响 | 第95页 |
| 5.2 结果与分析 | 第95-101页 |
| 5.2.1 BL21/InpN/vp7-Mah粘附和侵染EPC细胞能力分析 | 第95-96页 |
| 5.2.2 不同胞吞抑制剂对BL21/InpN/vp7-Mah侵染EPC的影响 | 第96-97页 |
| 5.2.3 BL21/InpN/vp7-Mah侵染对EPC细胞F-actin的影响 | 第97-99页 |
| 5.2.4 细胞松弛素D对BL21/InpN/vp7-Mah侵染EPC的影响 | 第99页 |
| 5.2.5 BL21/InpN/vp7-Mah侵染对EPC细胞p38激酶和HSP27磷酸化的影响 | 第99-100页 |
| 5.2.6 p38 激酶抑制剂对 BL21/InpN/vp7-Mah 侵染 EPC 的影响 | 第100-101页 |
| 5.3 讨论 | 第101-102页 |
| 5.4 小结 | 第102-103页 |
| 结论 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-117页 |
| 附录 | 第117-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 作者简介 | 第122-123页 |
