| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩写说明 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-22页 |
| 引言 | 第11页 |
| ·miRNAs生物发生过程与作用机制 | 第11-13页 |
| ·miRNA的功能 | 第13-14页 |
| ·与植物生长发育相关的miRNA | 第14-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第2章 水稻miR156基因克隆与超表达载体的构建 | 第22-34页 |
| ·材料与方法 | 第22-28页 |
| ·供试材料 | 第22-23页 |
| ·仪器设备和试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-28页 |
| ·水稻基因组提取 | 第23-24页 |
| ·大量提取 | 第23-24页 |
| ·少量提取 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·PCR | 第25页 |
| ·DNA片断切胶纯化 | 第25-26页 |
| ·双酶切反应 | 第26页 |
| ·连接反应 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第26-27页 |
| ·转化和筛选 | 第27页 |
| ·质粒提纯 | 第27-28页 |
| ·测序和序列分析 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-32页 |
| ·Os-miR156引物设计 | 第28页 |
| ·Os-miR156基因克隆 | 第28-30页 |
| ·水稻IPS1(Os-IPS1)基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·抑制Os-miR156功能的载体构建 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第3章 水稻miR156表达载体的遗传转化 | 第34-45页 |
| ·材料与方法 | 第34-38页 |
| ·水稻品种和农杆菌菌株 | 第34页 |
| ·仪器设备和试剂 | 第34页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第34-35页 |
| ·农杆菌电激转化 | 第35页 |
| ·重组转化子的PCR鉴定 | 第35页 |
| ·农杆菌的培养 | 第35-36页 |
| ·幼胚愈伤组织诱导培养 | 第36页 |
| ·成熟胚愈伤组织诱导培养 | 第36-37页 |
| ·水稻愈伤组织与农杆菌的共培养 | 第37页 |
| ·抗性愈伤组织筛选 | 第37页 |
| ·抗性愈伤组织分化 | 第37页 |
| ·生根、壮苗及移栽 | 第37页 |
| ·水稻基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·转基因水稻植株的PCR鉴定 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·农杆菌转化 | 第38页 |
| ·愈伤组织的诱导和培养 | 第38-39页 |
| ·农杆菌介导遗传转化水稻条件优化 | 第39-40页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选 | 第40页 |
| ·抗性愈伤组织的植株分化与生根 | 第40页 |
| ·T_0代转基因水稻植株的PCR检测 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-45页 |
| 第4章 转基因水稻性状分析 | 第45-55页 |
| ·材料与方法 | 第45-47页 |
| ·供试材料 | 第45页 |
| ·仪器设备和试剂 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·生长发育的表型性状分析 | 第45页 |
| ·半薄切片观察 | 第45-46页 |
| ·水稻sRNA提取 | 第46页 |
| ·水稻总RNA提取 | 第46-47页 |
| ·qPCR | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-52页 |
| ·Os-miR156的过量表达以及对其它miRNA的影响 | 第47-48页 |
| ·过量表达Os-miR156对靶基因SPL家族成员的影响 | 第48-49页 |
| ·转基因植株表型分析 | 第49-51页 |
| ·显微结构比较 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| 第5章 结论和进一步研究建议 | 第55-56页 |
| ·结论 | 第55页 |
| ·进一步的研究建议 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-67页 |
| 附录Ⅰ | 第67-70页 |
| 附录Ⅱ | 第70-72页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
