| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第7-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-25页 |
| 1. 中国大鲵养殖现状 | 第12页 |
| 2. 大鲵常见病害概况 | 第12-14页 |
| 2.1 大鲵寄生虫病 | 第13页 |
| 2.2 大鲵真菌病 | 第13页 |
| 2.3 大鲵细菌病 | 第13页 |
| 2.4 大鲵蛙病毒病 | 第13-14页 |
| 3. 蛙病毒概述 | 第14-19页 |
| 3.1 蛙病毒感染的分布与危害 | 第15页 |
| 3.2 蛙病毒的形态特征与分子特性 | 第15-16页 |
| 3.3 蛙病毒致病性和免疫性 | 第16-17页 |
| 3.4 蛙病毒的分类 | 第17-18页 |
| 3.5 大鲵蛙病毒基因组学 | 第18页 |
| 3.6 US22家族基因 | 第18-19页 |
| 4. 蛙病毒感染的诊断方法 | 第19-21页 |
| 4.1 电镜技术 | 第19-20页 |
| 4.2 组织培养法 | 第20页 |
| 4.3 免疫学检测技术 | 第20-21页 |
| 4.4 分子生物学检测方法 | 第21页 |
| 5. 实时荧光定量PCR技术概述 | 第21-24页 |
| 5.1 qPCR技术的优点及分类 | 第21-23页 |
| 5.2 qPCR技术的应用 | 第23-24页 |
| 6. 本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 第二部分 实验部分 | 第25-48页 |
| 1. 材料 | 第25-26页 |
| 1.1 病毒与细菌 | 第25页 |
| 1.2 试验样品 | 第25页 |
| 1.3 主要试剂与仪器 | 第25页 |
| 1.4 主要试剂的配制方法 | 第25-26页 |
| 2. 方法 | 第26-32页 |
| 2.1 阳性标准品的制备 | 第26-30页 |
| 2.1.1 引物探针的设计合成 | 第26-27页 |
| 2.1.2 总DNA的提取 | 第27页 |
| 2.1.3 CGSRV的49L ORF的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.1.4 CGSRV的49L ORF的T-载体克隆与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.1.5 重组质粒pMD19-T-49L的提取与测序 | 第29-30页 |
| 2.1.6 标准品浓度的测定及计算 | 第30页 |
| 2.2 TaqMan MGB qPCR的建立 | 第30-31页 |
| 2.2.1 标准品的连续10倍梯度稀释 | 第30页 |
| 2.2.2 TaqMan MGB qPCR条件的优化 | 第30-31页 |
| 2.2.3 TaqMan MGB qPCR标准曲线的建立 | 第31页 |
| 2.3 TaqMan MGB qPCR的检测 | 第31-32页 |
| 2.3.1 TaqMan MGB qPCR特异性的检测 | 第31页 |
| 2.3.2 TaqMan MGB qPCR敏感性的检测 | 第31页 |
| 2.3.3 TaqMan MGB qPCR重复性的检测 | 第31-32页 |
| 2.3.4 TaqMan MGB qPCR临床样品的检测 | 第32页 |
| 3. 结果 | 第32-43页 |
| 3.1 阳性标准品的制备结果 | 第32-35页 |
| 3.1.1 常规PCR条件优化结果 | 第32-33页 |
| 3.1.2 49L ORF的PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| 3.1.3 49L ORF的胶回收检测结果 | 第34页 |
| 3.1.4 阳性克隆菌菌落PCR鉴定结果 | 第34-35页 |
| 3.1.5 重组质粒的测序结果 | 第35页 |
| 3.1.6 阳性重组质粒浓度的测定 | 第35页 |
| 3.2 TaqMan MGB qPCR的建立结果 | 第35-37页 |
| 3.2.1 标准品制备结果 | 第35-36页 |
| 3.2.2 TaqMan MGB qPCR的条件优化结果 | 第36页 |
| 3.2.3 标准曲线的建立 | 第36-37页 |
| 3.3 TaqMan MGB qPCR的检测结果 | 第37-43页 |
| 3.3.1 TaqMan MGB qPCR的特异性检测结果 | 第37-38页 |
| 3.3.2 TaqMan MGB qPCR的灵敏性检测结果 | 第38页 |
| 3.3.3 常规PCR的灵敏性检测结果 | 第38-39页 |
| 3.3.4 TaqMan MGB qPCR的重复性检测结果 | 第39-40页 |
| 3.3.5 临床样品的检测结果 | 第40-43页 |
| 4. 讨论 | 第43-47页 |
| 5. 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第57页 |
