| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-25页 |
| ·嗜中性多形核粒细胞(PMNs)的作用机制以及内源性抗菌肽的简介 | 第13-14页 |
| ·嗜中性多形核粒细胞(PMNs)的作用机制 | 第13-14页 |
| ·(PMNs)抗菌肽的简介 | 第14页 |
| ·杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的分布及特点 | 第14-16页 |
| ·杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的分布 | 第14-15页 |
| ·杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的特点 | 第15页 |
| ·杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的作用机理 | 第15-16页 |
| ·杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的组成及结构 | 第16-18页 |
| ·杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的组成 | 第16页 |
| ·杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的结构 | 第16-18页 |
| ·BPI在生物学活性方面的研究 | 第18-24页 |
| ·BPI在杀灭GNB方面的作用 | 第18-19页 |
| ·BPI在中和内毒素方面的作用 | 第19-21页 |
| ·BPI在抗真菌方面的应用前景 | 第21-22页 |
| ·BPI在中和肝素方面的应用 | 第22-23页 |
| ·BPI在抗血管生成方面的应用 | 第23页 |
| ·BPI对革兰阳性细菌L-型的杀灭作用 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 2 材料 | 第25-29页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·实验菌株 | 第25页 |
| ·实验所需载体 | 第25页 |
| ·实验主要培养基 | 第25-26页 |
| ·实验主要试剂 | 第26页 |
| ·实验主要仪器 | 第26页 |
| ·实验主要溶液的配制方法 | 第26-29页 |
| ·实验中细菌培养液以及培养基的配制方法 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖核酸电泳使用溶液的配制 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE所需溶液的相关配制 | 第27-28页 |
| ·BPI-N蛋白纯化所需溶液的相关配制 | 第28-29页 |
| 3 实验方法 | 第29-45页 |
| ·BPI-N目的基因的PCR扩增 | 第29-31页 |
| ·BPI-N目的基因的获取 | 第29页 |
| ·BPI-N目的基因扩增引物的设计 | 第29页 |
| ·BPI-N目的基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·BPI-N目的基因的凝胶回收 | 第30-31页 |
| ·pMD19-BPI-N重组载体质粒的构建 | 第31-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞(DH5α)的制备 | 第31页 |
| ·重组子质粒的连接 | 第31-32页 |
| ·重组子质粒的转化 | 第32页 |
| ·重组载体的筛选 | 第32-33页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第33-35页 |
| ·BPI-N目的基因的原核表达 | 第35-40页 |
| ·感受态细胞BL21(DE3)的制备 | 第35页 |
| ·pET-32a-BPI-N原核表达质粒的构建 | 第35-37页 |
| ·双酶切胶回收产物BPI-N目的基因 | 第37页 |
| ·双酶切胶回收pET-32a空载体 | 第37页 |
| ·目的基因BPI-N与pET-32a的连接 | 第37-38页 |
| ·目的基因BPI-N与pET-32a的转化 | 第38页 |
| ·重组子表达质粒pET-32a-BPI-N的筛选 | 第38页 |
| ·重组子表达质粒pET-32a-BPI-N的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pET-32a-BPI-N的原核表达 | 第39-40页 |
| ·重组宿主菌表达产物的检测 | 第40-43页 |
| ·重组宿主菌BL21(DE3)表达产物检测 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白表达形式的判定 | 第41页 |
| ·BPI-N重组蛋白诱导时间以及IPTG浓度的优化 | 第41-42页 |
| ·BPI-N端融合蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·BPI-N端融合蛋白的切割 | 第43页 |
| ·猪源杀菌/通透性增加蛋白N端(BPI-N)的抑菌活性 | 第43-44页 |
| ·猪源杀菌/通透性增加蛋白N端(BPI-N)对细菌抑制活性的测定 | 第43-44页 |
| ·猪源杀菌/通透性增加蛋白N端(BPI-N)稳定性的研究 | 第44-45页 |
| ·热处理对BPI-N抑菌活性的影响 | 第44页 |
| ·不同的PH值对BPI-N抑菌活性的影响 | 第44页 |
| ·紫外光线照射对BPI-N抑菌活性的影响 | 第44-45页 |
| 4 实验结果 | 第45-60页 |
| ·BPI-N端基因的克隆以及鉴定 | 第45-49页 |
| ·BPI-N端目的基因的获取(PCR扩增) | 第45页 |
| ·pMD19-T-BPI-N端质粒的构建 | 第45页 |
| ·pMD19-T-BPI-N端质粒的鉴定 | 第45-47页 |
| ·pET-32a-BPI-N重组表达质粒的鉴定 | 第47-49页 |
| ·重组质粒pET-32a-BPI-N端的原核表达 | 第49-55页 |
| ·融合表达产物pET-32a-BPI-N的SDS-PAGE鉴定 | 第49-50页 |
| ·关于重组融合蛋白存在形式的判定 | 第50-51页 |
| ·对重组蛋白诱导时间、IPTG浓度的优化 | 第51-53页 |
| ·纯化重组融合蛋白 | 第53-54页 |
| ·重组融合蛋白的切割 | 第54-55页 |
| ·猪源杀菌/通透性增加蛋白N端(BPI-N)对细菌抑制活性的检测 | 第55-57页 |
| ·猪源杀菌/通透性增加蛋白N端(BPI-N)稳定性的研究 | 第57-60页 |
| ·热处理对猪源杀菌/通透性增加蛋白N端(BPI-N)抑菌活性的影响 | 第57-58页 |
| ·紫外光照射对猪源杀菌/通透性增加蛋白N端(BPI-N)抗菌活性的影响 | 第58-59页 |
| ·不同PH值的处理对猪源杀菌/通透性增加蛋白N端(BPI-N)抗菌活性的影响 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-62页 |
| ·外源基因融合表达的意义 | 第60-61页 |
| ·pET-32a-BPI-N重组蛋白的纯化以及切割 | 第61页 |
| ·对重组蛋白的抗菌活性以及稳定性的研究 | 第61-62页 |
| 6 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
