| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| ·研究背景 | 第9-10页 |
| ·苯酚 | 第9页 |
| ·苯酚的生产方法 | 第9-10页 |
| ·国内外研究进展 | 第10-15页 |
| ·苯酚生物合成途径的构建 | 第10-11页 |
| ·对羟基苯甲酸脱羧酶 | 第11-12页 |
| ·莽草酸途径和分支酸途径 | 第12-13页 |
| ·微生物代谢工程的手段和改造策略 | 第13-15页 |
| ·研究目的及意义,研究内容 | 第15-19页 |
| ·研究目的及意义 | 第15页 |
| ·研究内容 | 第15-19页 |
| 2 材料方法 | 第19-42页 |
| ·材料 | 第19-25页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第19-20页 |
| ·仪器和设备 | 第20-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第21-22页 |
| ·引物 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·菌种培养方法 | 第25页 |
| ·苯酚产量的检测方法 | 第25页 |
| ·大肠杆菌的遗传改造方法 | 第25-28页 |
| ·大肠杆菌对苯酚的耐受性实验 | 第28页 |
| ·克隆外源编码对羟基苯甲酸脱羧酶基因 | 第28-31页 |
| ·克隆分支酸途径中的关键基因 | 第31-33页 |
| ·克隆编码DAHP合酶基因 | 第31-33页 |
| ·克隆分支酸-丙酮酸裂解酶基因 | 第33页 |
| ·将外源YCL操纵子整合到野生型大肠杆菌ATCC 8739染色体上 | 第33-36页 |
| ·组成型质粒184M-P12-ycl的构建 | 第33-35页 |
| ·一步同源重组法整合ycl操纵子 | 第35-36页 |
| ·苯酚生物合成途径的优化 | 第36-40页 |
| ·解除DAHP合酶反馈抑制 | 第36-38页 |
| ·调控ubiC基因增加前体物质pHBA的供给 | 第38-40页 |
| ·调控ycl操纵子提高苯酚产量 | 第40页 |
| ·双相发酵所需有机萃取溶剂的选择 | 第40-41页 |
| ·高产菌株PHE009的高细胞密度发酵 | 第41-42页 |
| ·高细胞密度发酵 | 第41页 |
| ·双相高细胞密度发酵 | 第41-42页 |
| 3 结果与讨论 | 第42-65页 |
| ·大肠杆菌对苯酚的耐受性 | 第42-43页 |
| ·苯酚的检测 | 第43页 |
| ·苯酚生物合成途径的构建与优化 | 第43-48页 |
| ·表达外源对羟基苯甲酸脱羧酶基因的质粒的构建 | 第44页 |
| ·表达DAHP合酶基因的质粒的构建 | 第44-46页 |
| ·表达分支酸-丙酮酸裂解酶基因的质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·质粒过表达关键酶的菌株的苯酚产量 | 第47-48页 |
| ·遗传稳定的苯酚生产菌株的构建 | 第48-60页 |
| ·ycl操纵子的染色体整合 | 第48-51页 |
| ·aroG基因的定点突变及染色体水平调控 | 第51-53页 |
| ·ubiC基因的染色体整合及调控 | 第53-56页 |
| ·ycl操纵子的染色体水平调控 | 第56-57页 |
| ·基因型稳定菌株的苯酚产量 | 第57-60页 |
| ·双相发酵所需有机萃取溶剂的选择 | 第60-61页 |
| ·高细胞密度发酵重组菌株PHE009 | 第61-65页 |
| ·单相高密度发酵 | 第61-62页 |
| ·双相高密度发酵 | 第62-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 5 展望 | 第66-67页 |
| 6 参考文献 | 第67-75页 |
| 7 论文发表情况 | 第75-76页 |
| 8 致谢 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |