| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| ·类胡萝卜素的概述 | 第13-16页 |
| ·类胡萝卜素的种类和结构 | 第13-15页 |
| ·类胡萝卜素的功能 | 第15-16页 |
| ·类胡萝卜素的生物合成 | 第16-26页 |
| ·类胡萝卜素生物合成过程 | 第16-22页 |
| ·类胡萝卜素生物合成过程相关的酶和基因 | 第22-26页 |
| ·类胡萝卜素羟化酶 | 第26-28页 |
| ·亚铁血红素依赖型类胡萝卜素羟化酶(BCH) | 第26-27页 |
| ·细胞色素P450家族类胡萝卜素羟化酶(CYP97) | 第27-28页 |
| ·本文研究目的和意义 | 第28-31页 |
| 第二章 两株绿藻类胡萝卜素羟化酶基因克隆和序列分析 | 第31-51页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·藻种 | 第31页 |
| ·实验试剂 | 第31-32页 |
| ·仪器和设备 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-40页 |
| ·总RNA的提取 | 第32页 |
| ·DNA污染的消化和反转录 | 第32-33页 |
| ·3'、5'RACE模板的制备 | 第33-34页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·两株绿藻类胡萝卜素羟化酶基因cDNA全长的克隆 | 第35-37页 |
| ·两株绿藻类胡萝卜素羟化酶基因基因组序列的克隆 | 第37页 |
| ·目的片段的回收 | 第37-38页 |
| ·连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌Top10感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·转化 | 第38页 |
| ·阳性克隆检测 | 第38-39页 |
| ·生物信息学分析 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-50页 |
| ·两株绿藻总RNA及基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·类胡萝卜素羟化酶基因cDNA全长克隆 | 第41-42页 |
| ·生物信息学分析 | 第42-49页 |
| ·类胡萝卜素羟化酶基因组序列克隆及剪接方式分析 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| 第三章 雨生红球藻Haecyp97c 5'侧翼序列克隆及分析 | 第51-59页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·藻种和培养条件 | 第51页 |
| ·实验试剂 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-54页 |
| ·雨生红球藻基因组提取 | 第51页 |
| ·染色体步移引物设计 | 第51-52页 |
| ·初次PCR反应 | 第52页 |
| ·二次PCR反应 | 第52-53页 |
| ·三次PCR反应 | 第53-54页 |
| ·5'端侧翼序列的分析 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-57页 |
| ·5'侧翼序列的克隆 | 第54页 |
| ·5'侧翼序列顺式作用元件分析 | 第54-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 高光胁迫下雨生红球藻Haecyp97c mRNA表达水平及类胡萝卜素积累的研究 | 第59-67页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·藻种和培养条件 | 第59页 |
| ·实验试剂 | 第59页 |
| ·仪器和设备 | 第59-60页 |
| ·方法 | 第60-62页 |
| ·荧光定量PCR检测高光诱导下Haecyp97c mRNA转录水平变化 | 第60-61页 |
| ·HPLC检测高光胁迫下雨生红球藻类胡萝卜素积累的变化 | 第61-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-65页 |
| ·荧光定量PCR检测高光诱导下Haecyp97c mRNA转录水平变化 | 第62-63页 |
| ·HPLC检测高光胁迫下雨生红球藻类胡萝卜素含量变化 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 高光胁迫下小球藻Ckecyp97a mRNA表达水平及类胡萝卜素积累的研究 | 第67-73页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·藻种和培养条件 | 第67页 |
| ·实验试剂 | 第67页 |
| ·仪器和设备 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-68页 |
| ·荧光定量PCR检测高光诱导下Ckecyp97a mRNA转录水平变化 | 第67-68页 |
| ·HPLC检测高光胁迫下小球藻类胡萝卜素积累的变化 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-71页 |
| ·荧光定量PCR检测高光诱导下Ckecyp97a mRNA转录水平变化 | 第68-70页 |
| ·HPLC检测高光胁迫下小球藻类胡萝卜素含量变化 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 第六章 雨生红球藻类胡萝卜素羟化酶基因的原核表达和功能验证 | 第73-83页 |
| ·材料 | 第73-74页 |
| ·菌株、质粒 | 第73-74页 |
| ·实验试剂 | 第74页 |
| ·仪器和设备 | 第74页 |
| ·方法 | 第74-78页 |
| ·pET-28a(+)质粒抽提 | 第74-75页 |
| ·雨生红球藻类胡萝卜素羟化酶基因ORF的克隆 | 第75页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第75-76页 |
| ·重组质粒的原核表达和SDS-PAGE分析 | 第76-77页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌体内的功能验证 | 第77-78页 |
| ·结果与分析 | 第78-82页 |
| ·类胡萝卜素羟化酶基因ORF的克隆 | 第78页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第78-79页 |
| ·重组质粒的原核表达和SDS-PAGE分析 | 第79-81页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌体内色素种类和含量分析 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-83页 |
| 全文总结 | 第83-85页 |
| 创新点 | 第85-87页 |
| 展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-103页 |
| 附录 | 第103-107页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
