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基于高通量测序的松材线虫致病机理与毒力差异研究

致谢第1-4页
摘要第4-6页
Abstract第6-13页
前言第13-15页
第一章 文献综述第15-26页
 1 松材线虫病研究进展第15-17页
   ·松材线虫病病原相关研究第15-16页
   ·松材线虫病致病机理的相关研究第16-17页
   ·松材线虫病的防治第17页
   ·强弱毒虫株相关研究第17页
 2 miRNAs的相关研究第17-22页
   ·miRNAs的特征与预测方法第18页
   ·miRNAs转录与成熟第18-20页
   ·miRNAs调控机制第20-21页
     ·翻译裂解机制第20-21页
     ·翻译抑制机制第21页
   ·靶基因识别第21-22页
   ·松材线虫miRNAs的研究第22页
 3. 高通量测序应用第22-24页
   ·测序技术的升级第22-23页
   ·高通量测序在基因组方面的应用第23页
   ·高通量测序在转录组方面的应用第23-24页
   ·高通量测序在松材线虫中的相关研究第24页
 4. 本研究的目的与意义第24-26页
第二章 松材线虫侵染松树过程中的miRNAs研究第26-55页
 1 材料与方法第26-30页
   ·松材线虫供试虫株第26页
   ·松材线虫的接种实验第26-27页
   ·miRNA文库的构建以及高通量测序第27页
   ·生物信息学分析第27-30页
     ·构建松材线虫miRNAs参考数据库第27页
     ·保守miRNAs的鉴定第27-28页
     ·未知miRNAs以及miRNAs STAR(miRNAs*)的鉴定第28页
     ·靶基因预测与GO富集分析第28页
     ·起源于内含子的一类miRNAs(mirtrons)的鉴定第28-29页
     ·miRNAs前体以及相对表达量验证第29-30页
 2. 结果与分析第30-52页
   ·松材线虫miRNAs参考序列的构建第32页
   ·松材线虫相对保守miRNAs的注释分析第32-36页
   ·metazoan miRNAs的注释第36-38页
   ·松材线虫未知miRNAs的鉴定第38-46页
   ·松材线虫miRNAs*第46-47页
   ·保守miRNAs表达图谱分析第47-49页
   ·松材线虫mirtron的注释第49-50页
   ·靶基因预测与GO富集分析第50-51页
   ·试验验证miRNAs对纤维素酶活性的调控作用第51-52页
 3. 结论与讨论第52-55页
第三章 松材线虫强弱毒虫株的转录组研究第55-74页
 1 材料与方法第55-58页
   ·供试线虫虫株与毒力测定第55-56页
   ·RNA的提取第56页
   ·ITS-PCR-RFLP扩增第56-57页
   ·测序结果分析第57-58页
     ·松材线虫转录组的组装与注释第57-58页
     ·差异表达的转录本以及外显子分析第58页
     ·外显子缺失的鉴定第58页
 2 结果与分析第58-72页
   ·转录组的组装与注释结果分析第59-60页
   ·不同毒力的松材线虫线虫间差异表达转录本分析第60-63页
   ·松材线虫外显子水平表达差异与外显子缺失现象分析第63-72页
 3. 结论与讨论第72-74页
第四章 松材线虫强弱毒虫株的SNPs分析第74-89页
 1. 材料与方法第74-77页
   ·供试线虫虫株与毒力测定第74页
   ·DNA的提取与高通量测序第74-75页
   ·基于Illumina高通量测序结果的SNPs分析第75-76页
   ·SNP位点的PCR扩增与Sanger测序第76-77页
 2. 结果与分析第77-87页
   ·松材线虫SNPs位点的初步统计分析第77-78页
   ·不同毒力松材线虫SNP位点的差异分析第78-83页
   ·SNP位点的试验验证第83-87页
 3. 结论与讨论第87-89页
第五章 全文总结及研究展望第89-92页
 1 主要结论第89-90页
 2 论文创新点第90页
 3 存在问题与研究展望第90-92页
附录 交流学习期间发表论文第92-106页
 研究背景第92-93页
 1 材料与方法第93-94页
   ·组织细胞培养与 5-Aza-CdR处理第93页
   ·Illumina高通量测序第93页
   ·数据分析第93-94页
   ·Illumina Infinium HM450 DNA甲基化芯片第94页
   ·外显子缺失现象的PCR验证第94页
 2 结果与分析第94-104页
   ·5-Aza-CdR诱导的基因表达变化第94-98页
   ·5-Aza-CdR诱导下外显子水平的差异表达第98-100页
   ·5-Aza-CdR诱导的外显子缺失现象第100-103页
   ·DNA甲基化与 5-Aza-CdR去甲基化第103-104页
 3 结论与讨论第104-106页
攻读学位期间发表的学术论文及获奖情况第106-107页
参考文献第107-118页

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