| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| ·结核杆菌的简介 | 第8-9页 |
| ·结合分枝杆菌持留性 | 第9-10页 |
| ·苹果酸合成酶的简介 | 第10-14页 |
| ·苹果酸合成酶的编码基因及蛋白结构 | 第10-11页 |
| ·苹果酸合成酶Glc B基因表达条件 | 第11-12页 |
| ·苹果酸合成酶的催化机理 | 第12-13页 |
| ·金属离子、p H值对苹果酸合成酶酶活力的影响 | 第13页 |
| ·苹果酸合成酶在乙醛酸循环过程中的作用 | 第13-14页 |
| ·多肽药物的研发 | 第14-15页 |
| ·多肽药物特点 | 第14页 |
| ·多肽药物靶点 | 第14-15页 |
| ·抗结核病多肽药物的研发 | 第15-16页 |
| ·抗结核多肽药物靶点的研究现状 | 第15-16页 |
| ·以苹果酸合成酶为药物靶点开发可能性 | 第16页 |
| ·药物模拟筛选 | 第16-17页 |
| ·小结 | 第17-18页 |
| 第二章 材料和方法 | 第18-35页 |
| ·主要材料 | 第18-20页 |
| ·试剂及仪器 | 第18-20页 |
| ·菌株及质粒 | 第20页 |
| ·培养基与溶液配制 | 第20-21页 |
| ·H37RV菌株的培养 | 第21-22页 |
| ·基因组DNA提取 | 第22页 |
| ·PCR扩增目的基因及回收纯化 | 第22-25页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·PCR反应体系及条件 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳： | 第23-24页 |
| ·目的基因回收、纯化 | 第24-25页 |
| ·载体构建、转化及筛选 | 第25-28页 |
| ·克隆载体的构建 | 第26页 |
| ·表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·重组质粒转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的蓝白斑筛选 | 第27-28页 |
| ·质粒提取、纯化及酶切鉴定 | 第28-30页 |
| ·碱法小量提取质粒及纯化 | 第28页 |
| ·碱法大量提取质粒及纯化 | 第28-29页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·目的蛋白的诱导表达与纯化 | 第30页 |
| ·IPTG诱导转化菌表达苹果酸合成酶 | 第30页 |
| ·Glc B蛋白表达产物的纯化 | 第30页 |
| ·Glc B蛋白诱导表达及纯化产物的鉴定 | 第30-32页 |
| ·GLCB蛋白的活性检测 | 第32-33页 |
| ·分子对接模拟 | 第33页 |
| ·多肽合成、纯化鉴定及其抑制检测 | 第33-35页 |
| 第三章 实验结果 | 第35-50页 |
| ·GLCB基因提取及测序鉴定 | 第35-38页 |
| ·提取结核分枝杆菌的基因组与设计Glc B基因PCR引物 | 第35页 |
| ·GlcB基因PCR扩增结果 | 第35-36页 |
| ·pUM-T质粒与目的基因连接以及测序结果 | 第36-38页 |
| ·PET28A（+）-GLCB重组原核表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·pET-28a（+）-glcb重组质粒鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE鉴定重组表达产物的结果 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE鉴定产物诱导表达条件 | 第40-43页 |
| ·不同诱导时间对MS表达的影响 | 第40-41页 |
| ·不同诱导剂浓度对MS表达的影响 | 第41-42页 |
| ·不同诱导温度对MS表达的影响 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE鉴定表达产物存在形式 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白纯化条件优化 | 第44-45页 |
| ·重组MS的酶活性测定 | 第45页 |
| ·分子对接结果 | 第45-47页 |
| ·肽的固相合成鉴定及抑制作用 | 第47-50页 |
| ·合成肽的纯化及质谱鉴定 | 第47-48页 |
| ·合成肽对MS抑制作用检测 | 第48-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第62页 |