| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| ·生物钟概论 | 第11页 |
| ·生物钟的组成及分子机制 | 第11-13页 |
| ·生物钟与疾病 | 第13页 |
| ·斑马鱼作为模式生物的优势 | 第13-15页 |
| ·CRISPR-Cas9的来源以及作用原理 | 第15-16页 |
| ·groucho基因 | 第16-18页 |
| ·groucho基因的发现 | 第16页 |
| ·groucho基因的结构 | 第16-17页 |
| ·groucho基因的功能 | 第17页 |
| ·斑马鱼groucho基因 | 第17-18页 |
| ·技术路线 | 第18页 |
| ·立题意义和主要研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-39页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·实验试剂 | 第20-21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·常用溶液与试剂的配制方法 | 第22-23页 |
| ·细菌培养基 | 第22页 |
| ·核酸电泳相关溶液 | 第22页 |
| ·Inoue法制备超级感受态细胞及相关溶液 | 第22-23页 |
| ·Western Blot相关试剂配制 | 第23页 |
| ·其他相关溶液 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-37页 |
| ·斑马鱼交配与胚胎收集 | 第23页 |
| ·斑马鱼胚胎总RNA提取 | 第23-24页 |
| ·RNA反转录制备c DNA模板 | 第24页 |
| ·荧光定量 PCR | 第24-25页 |
| ·启动子的克隆 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物切胶回收 | 第26页 |
| ·目的片段连接到 PGL4.17-luciferase 载 | 第26-27页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第27-28页 |
| ·细胞培养 | 第28-29页 |
| ·荧光素酶双报告基因实验 | 第29页 |
| ·染色质免疫共沉淀 | 第29-31页 |
| ·斑马鱼的运动行为检测 | 第31-32页 |
| ·构建gro1和gro2突变体 | 第32-34页 |
| ·胚胎显微注射 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第35-36页 |
| ·酶切反应体系 | 第36页 |
| ·免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP） | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第37-39页 |
| 第三章 实验结果及分析 | 第39-60页 |
| ·TLE/Grg/Gro蛋白家族进化分析 | 第39-40页 |
| ·斑马鱼体内gro1和gro2基因呈现生物钟节律表达 | 第40-42页 |
| ·斑马鱼体内gro1和gro2基因在正常光暗条件和持续黑暗条件下的表达 | 第40-41页 |
| ·斑马鱼gro1和gro2基因在bmal1b和per1b突变体中的表达 | 第41-42页 |
| ·斑马鱼gro1和gro2基因受生物钟直接调控 | 第42-44页 |
| ·斑马鱼gro1和gro2基因启动子分析以及染色质免疫共沉淀 | 第42-43页 |
| ·斑马鱼gro1和gro2基因启动子的转录调控 | 第43-44页 |
| ·CRISPR-Cas9构建斑马鱼gro1和gro2基因的突变体 | 第44-46页 |
| ·gro1基因CRISPR-Cas9位点的设计以及活性验证 | 第44-45页 |
| ·gro2基因CRISPR-Cas9位点的设计以及活性验证 | 第45-46页 |
| ·斑马鱼gro1和gro2基因突变后对生物钟基因表达的影响 | 第46-50页 |
| ·正常光照条件下，生物钟基因在斑马鱼gro1和gro2基因突变体中的表达 | 第46-48页 |
| ·持续黑暗条件下，生物钟基因在斑马鱼gro1和gro2基因突变体中的表达 | 第48-50页 |
| ·斑马鱼gro1和gro2基因突变后对斑马鱼行为节律的影响 | 第50-53页 |
| ·正常光暗条件下，斑马鱼gro1和gro2基因突变体的行为节律 | 第50-51页 |
| ·持续黑暗条件下，斑马鱼gro1和gro2基因突变体的行为节律 | 第51-53页 |
| ·斑马鱼Gro1和Gro2蛋白与核心生物钟蛋白之间的作用关系 | 第53-54页 |
| ·反义核苷酸Morpholino（MO）同时敲降gro1和gro2基因的表达 | 第54-58页 |
| ·反义核苷酸MO的设计 | 第54页 |
| ·gro1基因TBMO（Translational Blocking MO）和SPMO（SplicingMO）的位点设计以及活性验证 | 第54-56页 |
| ·gro2基因TBMO（Translational Blocking MO）和SPMO（SplicingMO）的位点设计以及活性验证 | 第56-58页 |
| ·MO同时敲降gro1和gro2基因的表达对斑马鱼的行为节律的影响 | 第58-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-63页 |
| ·斑马鱼gro1和gro2基因直接受斑马鱼的核心生物钟调控 | 第60-61页 |
| ·斑马鱼gro1和gro2基因突变体内，生物钟基因表达变化以及行为节律的改变 | 第61页 |
| ·斑马鱼Gro1和Gro2蛋白与斑马鱼的核心生物钟蛋白之间的关系 | 第61-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 英文缩略词表 | 第70-71页 |
| 研究生期间已发表和待发表的论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
