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马甲状腺上皮细胞抗FMDV感染机制研究

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-13页
第一章 病毒感染及细胞抗病毒机制研究进展第13-41页
   ·病毒感染的机制第13-17页
     ·病毒和细胞死亡程序第13-14页
     ·干扰素和细胞死亡程序第14页
     ·细胞死亡的病毒抑制第14-17页
   ·FMDV的感染机制第17-33页
     ·FMDV病毒蛋白第18-19页
     ·与FMDV感染相关的先天免疫细胞第19-21页
     ·FMDV对先天免疫体统的影响第21-24页
     ·FMDV的相关受体第24-33页
   ·与抗病毒反应相关的信号通路第33-41页
     ·病毒介导的PI3K-AKT信号对细胞功能的影响第33-35页
     ·PI3K-Akt信号通路与抗病毒反应第35-38页
     ·RIG-I样受体的抗病毒反应第38-41页
第二章 马源和牛源整合素受体的差异研究第41-60页
   ·材料与方法第41-42页
     ·材料第41页
     ·试剂第41-42页
     ·主要仪器与耗材第42页
   ·方法第42-44页
     ·马、牛上皮细胞中αv、β亚基的表达第42-43页
     ·整合素αv、β亚基的基因及蛋白同源性对比第43页
     ·马和牛αv、β3、β6基因真核表达载体的构建第43页
     ·细胞转染第43-44页
   ·结果第44-56页
     ·αv和β亚基在上皮细胞中的表达第44-50页
     ·FMDV不能在马上皮细胞中中完成复制过程第50页
     ·FMDV在TYECs中的凋亡第50-51页
     ·马、牛整合素亚基αv、β3和β6应用效率对比第51-53页
     ·αvβ载体在SW480细胞中的瞬时表达第53-54页
     ·载体在COS-1细胞中的瞬时表达第54-56页
   ·讨论第56-59页
   ·小结第59-60页
第三章 基因表达谱检测差异表达基因第60-71页
   ·材料与方法第60-61页
     ·材料第60页
     ·试剂第60-61页
     ·主要仪器与耗材第61页
   ·方法第61-62页
     ·马、牛上皮细胞培养第61页
     ·表达谱芯片制作及数据分析第61页
     ·差异基因的表达验证第61-62页
   ·结果第62-68页
     ·BTYECs和ETYECs中的基因表达趋势不同第62页
     ·BTYECs和ETYECs中的差异基因比对结果第62-66页
     ·PI3K-Akt通路及Toll样受体通路与马对抗FMDV的感染相关第66-68页
   ·讨论第68-70页
   ·小结第70-71页
第四章 Toll样受体信号通路与PI3K-Akt信号通路验证第71-91页
   ·材料与方法第71-72页
     ·材料第71页
     ·试剂第71-72页
     ·主要仪器与耗材第72页
   ·方法第72-74页
     ·过表达载体构建第72-73页
     ·牛甲状腺上皮细胞TLR3,MyD88,IRF-3,IRF-7基因的干扰第73页
     ·Akt-X处理牛甲状腺上皮细胞第73页
     ·si-MyD88及Akt-X联合处理牛状腺上皮细胞第73页
     ·RNA提取及cDNA合成第73页
     ·牛甲状腺上皮细胞中相关基因的表达第73页
     ·免疫印迹(western blotting)法检测蛋白的表达第73页
     ·FMDV的复制情况检测第73-74页
     ·细胞凋亡检测第74页
   ·结果第74-85页
     ·pIRES2-EGFP-e-TLR3,pIRES2-EGFP-b-MyD88,pIRES2-EGFP-b-IRF7载体的功能验证结果第74-75页
     ·Si-e-TLR3,si-b-MyD88,si-b-IRF7的干扰功能验证结果第75-76页
     ·Si-e-TLR3,si-b-MyD88, si-b-IRF7最佳转染剂量的确定第76页
     ·TLR3,MyD88以及IRF7对PI3K-Akt和Toll样受体信号通路的影响第76-82页
     ·Akt的抑制影响PI3K-Akt通路与Toll样受体通路下游基因的表达第82-83页
     ·PI3K-Akt受体通路和TOLL-like receptor pathway协同参与马TYECs抗病毒过程第83-84页
     ·ASM,si-Myd88,Akt-x对凋亡的影响第84-85页
   ·讨论第85-90页
   ·小结第90-91页
结论第91-93页
创新之处和进一步研究的课题第93-94页
参考文献第94-115页
缩略词第115-118页
致谢第118-119页
作者简介第119页

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