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基于甲基化与lncRNA的绒山羊毛囊发育表观遗传学初步研究

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-13页
第一章 文献综述第13-20页
   ·陕北白绒山羊简介第13页
   ·毛囊发育相关基因的国内外研究概况第13-15页
     ·Hox基因第13-15页
     ·Msx-2 对毛囊发育的影响第15页
     ·FGF5对毛囊发育的影响第15页
   ·甲基化概述第15-17页
     ·甲基转移酶基因简介第15页
     ·DNA甲基化第15-16页
     ·DNA甲基化的功能及调控机制第16页
     ·Sequenom MassARRAY?甲基化检测技术第16页
     ·BSP甲基化检测技术第16-17页
   ·lncRNAs第17-18页
     ·lncRNAs简介第17页
     ·lncRNAs的研究进展第17-18页
   ·CRISPR/Cas9核酸酶技术第18-19页
     ·CRISPR/Cas9核酸酶技术的由来第18页
     ·CRISPR/Cas9核酸酶技术的优缺点第18-19页
     ·CRISPR/Cas9核酸酶技术的研究进展第19页
   ·研究的目的与意义第19-20页
第二章 毛囊发育相关基因的甲基化研究第20-29页
   ·材料与方法第20-24页
     ·实验动物选择与组织样采集第20页
     ·主要试剂及仪器第20页
     ·DNA提取及质量检测第20页
     ·Hoxc13基因甲基化检测试验过程第20-23页
     ·Msx-2、FGF5基因甲基化检测试验过程第23页
     ·数据统计分析第23-24页
   ·结果与分析第24-27页
     ·DNA质量检测分析第24页
     ·PCR扩增结果第24-25页
     ·Hoxc13基因甲基化差异的关联分析第25-26页
     ·Msx-2 基因甲基化差异的关联分析第26-27页
     ·FGF5基因甲基化差异的关联分析第27页
   ·讨论第27-28页
   ·小结第28-29页
第三章 DNMTs、Hoxc13基因在羊绒生长期和休止期的表达分析第29-38页
   ·实验材料与方法第29-32页
     ·试验动物与皮肤样品采集第29页
     ·主要试剂及仪器(见附录)第29页
     ·RNA提取的准备(见附录)第29页
     ·引物的设计第29-30页
     ·总RNA的提取第30页
     ·RNA质量与浓度检测第30页
     ·反转录及qRT-PCR第30-31页
     ·数据统计分析第31-32页
   ·结果与分析第32-36页
     ·RNA质量检测分析第32页
     ·qRT-PCR扩增体系检测结果第32-33页
     ·羊绒生长期与休止期DNMTs基因平均相对表达量第33-34页
     ·羊绒生长期和休止期Hoxc13基因平均相对表达量第34-35页
     ·羊绒生长期DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因的表达量第35页
     ·羊绒休止期DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因的表达量第35-36页
   ·讨论第36-37页
   ·小结第37-38页
第四章 靶向敲除绒山羊lnc15479的CRISPR/Cas9构建及活性验证第38-47页
   ·材料第38-39页
     ·细胞株和质粒第38-39页
     ·实验材料和试剂第39页
     ·主要仪器第39页
     ·引物合成和测序第39页
   ·方法第39-43页
     ·构建表达载体msgRNA-2第39-41页
     ·构建双荧光报告载体第41-43页
     ·在HEK293T细胞中检测CRISPR/Cas9活性第43页
   ·结果第43-45页
     ·CRISPR/Cas9真核表达载体及报告载体构建结果第43-44页
     ·CRISPR/Cas9在哺乳细胞中的活性检测第44-45页
   ·讨论第45-46页
   ·小结第46-47页
第五章 结论与展望第47-48页
   ·主要结论第47页
   ·主要创新点第47页
   ·需要进一步研究的问题第47-48页
参考文献第48-57页
附录第57-73页
致谢第73-74页
作者简介第74页

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