摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-20页 |
·陕北白绒山羊简介 | 第13页 |
·毛囊发育相关基因的国内外研究概况 | 第13-15页 |
·Hox基因 | 第13-15页 |
·Msx-2 对毛囊发育的影响 | 第15页 |
·FGF5对毛囊发育的影响 | 第15页 |
·甲基化概述 | 第15-17页 |
·甲基转移酶基因简介 | 第15页 |
·DNA甲基化 | 第15-16页 |
·DNA甲基化的功能及调控机制 | 第16页 |
·Sequenom MassARRAY?甲基化检测技术 | 第16页 |
·BSP甲基化检测技术 | 第16-17页 |
·lncRNAs | 第17-18页 |
·lncRNAs简介 | 第17页 |
·lncRNAs的研究进展 | 第17-18页 |
·CRISPR/Cas9核酸酶技术 | 第18-19页 |
·CRISPR/Cas9核酸酶技术的由来 | 第18页 |
·CRISPR/Cas9核酸酶技术的优缺点 | 第18-19页 |
·CRISPR/Cas9核酸酶技术的研究进展 | 第19页 |
·研究的目的与意义 | 第19-20页 |
第二章 毛囊发育相关基因的甲基化研究 | 第20-29页 |
·材料与方法 | 第20-24页 |
·实验动物选择与组织样采集 | 第20页 |
·主要试剂及仪器 | 第20页 |
·DNA提取及质量检测 | 第20页 |
·Hoxc13基因甲基化检测试验过程 | 第20-23页 |
·Msx-2、FGF5基因甲基化检测试验过程 | 第23页 |
·数据统计分析 | 第23-24页 |
·结果与分析 | 第24-27页 |
·DNA质量检测分析 | 第24页 |
·PCR扩增结果 | 第24-25页 |
·Hoxc13基因甲基化差异的关联分析 | 第25-26页 |
·Msx-2 基因甲基化差异的关联分析 | 第26-27页 |
·FGF5基因甲基化差异的关联分析 | 第27页 |
·讨论 | 第27-28页 |
·小结 | 第28-29页 |
第三章 DNMTs、Hoxc13基因在羊绒生长期和休止期的表达分析 | 第29-38页 |
·实验材料与方法 | 第29-32页 |
·试验动物与皮肤样品采集 | 第29页 |
·主要试剂及仪器(见附录) | 第29页 |
·RNA提取的准备(见附录) | 第29页 |
·引物的设计 | 第29-30页 |
·总RNA的提取 | 第30页 |
·RNA质量与浓度检测 | 第30页 |
·反转录及qRT-PCR | 第30-31页 |
·数据统计分析 | 第31-32页 |
·结果与分析 | 第32-36页 |
·RNA质量检测分析 | 第32页 |
·qRT-PCR扩增体系检测结果 | 第32-33页 |
·羊绒生长期与休止期DNMTs基因平均相对表达量 | 第33-34页 |
·羊绒生长期和休止期Hoxc13基因平均相对表达量 | 第34-35页 |
·羊绒生长期DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因的表达量 | 第35页 |
·羊绒休止期DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因的表达量 | 第35-36页 |
·讨论 | 第36-37页 |
·小结 | 第37-38页 |
第四章 靶向敲除绒山羊lnc15479的CRISPR/Cas9构建及活性验证 | 第38-47页 |
·材料 | 第38-39页 |
·细胞株和质粒 | 第38-39页 |
·实验材料和试剂 | 第39页 |
·主要仪器 | 第39页 |
·引物合成和测序 | 第39页 |
·方法 | 第39-43页 |
·构建表达载体msgRNA-2 | 第39-41页 |
·构建双荧光报告载体 | 第41-43页 |
·在HEK293T细胞中检测CRISPR/Cas9活性 | 第43页 |
·结果 | 第43-45页 |
·CRISPR/Cas9真核表达载体及报告载体构建结果 | 第43-44页 |
·CRISPR/Cas9在哺乳细胞中的活性检测 | 第44-45页 |
·讨论 | 第45-46页 |
·小结 | 第46-47页 |
第五章 结论与展望 | 第47-48页 |
·主要结论 | 第47页 |
·主要创新点 | 第47页 |
·需要进一步研究的问题 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-57页 |
附录 | 第57-73页 |
致谢 | 第73-74页 |
作者简介 | 第74页 |