| 摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-8页 |
| 1 前言 | 第8-19页 |
| ·CYP2J酶的特性 | 第8页 |
| ·CYP2J对物质代谢的作用 | 第8-10页 |
| ·CYP2J与内源性物质代谢 | 第8-9页 |
| ·CYP2J与外源性物质的代谢 | 第9-10页 |
| ·CYP2J成员基因相似性与定位 | 第10-11页 |
| ·CYP2J亚族各型的基因与表达特征及其代谢活性 | 第11-15页 |
| ·CYP2J1 | 第11页 |
| ·CYP2J2 | 第11页 |
| ·CYP2J3 | 第11-12页 |
| ·CYP2J4 | 第12页 |
| ·CYP2J5 | 第12页 |
| ·CYP2J6 | 第12-13页 |
| ·CYP2J8 | 第13页 |
| ·CYP2J9 | 第13页 |
| ·CYP2J10 | 第13页 |
| ·CYP2J11、CYP2J12和CYP2J13 | 第13-14页 |
| ·CYP2J16 | 第14页 |
| ·CYP2J34 | 第14页 |
| ·羊CYP2J | 第14-15页 |
| ·CYP2J及其代谢产物的生理功能 | 第15页 |
| ·在心血管系统的作用 | 第15页 |
| ·在肾脏的作用 | 第15页 |
| ·其他作用 | 第15页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第15-17页 |
| ·Real Time qPCR的原理 | 第16页 |
| ·Real Time qPCR的种类 | 第16-17页 |
| ·CYP450的原核表达 | 第17-18页 |
| ·原核表达的CYP450的表达量的提高 | 第18页 |
| ·原核表达的CYP450活性反应体系的构建 | 第18页 |
| ·本实验研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 实验一 双峰驼8种组织中CYP2J基因表达量的相对定量分析 | 第19-31页 |
| ·材料和方法 | 第19-24页 |
| ·实验材料 | 第19页 |
| ·主要实验试剂 | 第19-20页 |
| ·主要实验仪器 | 第20页 |
| ·主要溶液和试剂的配制 | 第20页 |
| ·RNA的提取 | 第20-21页 |
| ·RNA质量和完整性的检验 | 第21-22页 |
| ·反转录 | 第22页 |
| ·Real Time qPCR引物设计 | 第22页 |
| ·引物及模板的验证 | 第22-23页 |
| ·制作Real Time qPCR标准曲线 | 第23-24页 |
| ·Real Time qPCR相对定量检测 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-30页 |
| ·RNA质量与完整性检测 | 第24页 |
| ·引物及模板的初步验证 | 第24页 |
| ·Real Time qPCR检测前的验证 | 第24-25页 |
| ·Real Time qPCR相对定量检测结果 | 第25-30页 |
| ·小结与讨论 | 第30-31页 |
| 3 实验二 双峰驼CYP2J基因体外表达载体的构建 | 第31-44页 |
| ·材料与方法 | 第31-38页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·主要商品试剂 | 第31-32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第32-33页 |
| ·总RNA的提取、验证及反转录 | 第33页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·目的片段的扩增 | 第33-34页 |
| ·切胶回收纯化目的片段 | 第34页 |
| ·PCR产物添加Poly尾巴 | 第34页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体的连接 | 第34-35页 |
| ·重组质粒与感受态大肠杆菌DH5 α的转化 | 第35页 |
| ·TA重组质粒的鉴定 | 第35-37页 |
| ·用于插入表达载体的目的片段的获得 | 第37页 |
| ·体外表达载体的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-42页 |
| ·用于扩增CYP2J全长目的基因模板的验证 | 第38页 |
| ·双峰驼CYP2J目的基因的扩增 | 第38-39页 |
| ·胶回收产物验证 | 第39页 |
| ·重组质粒pMD18-T-CYP2J的鉴定 | 第39-41页 |
| ·体外表达载体pET-32a-CYP2J的验证 | 第41-42页 |
| ·小结与讨论 | 第42-44页 |
| 4 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |