| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 布鲁氏菌致病和免疫机制及自噬研究概述 | 第14-21页 |
| 1.布鲁氏菌致病及免疫的机制 | 第14-17页 |
| ·布鲁氏菌的胞内生存方式 | 第14-15页 |
| ·布鲁氏菌在胞内的运输 | 第15-16页 |
| ·布鲁氏菌的胞内复制 | 第16页 |
| ·布鲁氏菌与免疫 | 第16-17页 |
| 2.病原体感染与自噬研究进展 | 第17-21页 |
| ·细胞自噬的分类 | 第17页 |
| ·免疫信号对自噬的调节 | 第17-18页 |
| ·细胞自噬清除病原体 | 第18页 |
| ·病原体逃避细胞自噬 | 第18页 |
| ·病原体利用细胞自噬 | 第18页 |
| ·布鲁氏菌感染与自噬研究进展 | 第18-19页 |
| ·自噬在抗原递呈中作用的研究进展 | 第19-21页 |
| 第二章 实验部分 | 第21-55页 |
| 实验一 羊种布鲁氏菌感染小鼠巨噬细胞对MHC II表达和递呈的影响 | 第21-46页 |
| 摘要 | 第21-22页 |
| 1.材料方法 | 第22-35页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·巨噬细胞和菌株 | 第22页 |
| ·实验主要试剂 | 第22页 |
| ·实验主要仪器和设备 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-35页 |
| ·细胞培养液DMEM和PBS缓冲液配制 | 第22页 |
| ·小鼠巨噬细胞的培养 | 第22-23页 |
| ·羊种布鲁氏菌强毒株 16M的培养与鉴定 | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量引物设计 | 第24页 |
| ·RT-qPCR检测布鲁氏菌侵染巨噬细胞胞内MHC II转录水平 | 第24-26页 |
| ·构建Atg5和Atg7稳定表达载体 | 第26-31页 |
| ·重组慢病毒包装 | 第31-32页 |
| ·慢病毒感染GFP-LC3小鼠巨噬细胞 | 第32-33页 |
| ·RT-qPCR检测Atg5和Atg7转染效果 | 第33页 |
| ·RT-qPCR检测稳定表达Atg5和Atg7巨噬细胞MHC II转录水平 | 第33页 |
| ·激光共聚焦检测自噬小体和溶酶体融合率 | 第33-34页 |
| ·流式细胞技术检测细胞表面MHC II的表达量 | 第34-35页 |
| ·流式细胞技术检测细胞表面OMP31的荧光强度 | 第35页 |
| ·统计学分析 | 第35页 |
| 2.实验结果 | 第35-44页 |
| ·MHC II分子特异性引物和羊种布鲁氏菌强毒株 16M的鉴定 | 第35-36页 |
| ·RT-qPCR检测布鲁氏菌侵染IFN-γ 处理的巨噬细胞MHC II转录水平 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增Atg5、Atg7基因 | 第37-38页 |
| ·双酶切鉴定pMD19-T-Atg5重组载体和pMD19-T-Atg7重组载体 | 第38-39页 |
| ·RT-qPCR检测转染效率 | 第39-40页 |
| ·RT-qPCR检测布鲁氏菌诱导的自噬对细胞内MHC II转录水平的影响 | 第40页 |
| ·布鲁氏菌 16M诱导的自噬对细胞自噬小体和溶酶体融合率影响 | 第40-41页 |
| ·布鲁氏菌 16M诱导的自噬对细胞表面MHC II表达水平的研究 | 第41-43页 |
| ·布鲁氏菌 16M诱导的自噬对MHC II抗原递呈能力的影响 | 第43-44页 |
| 3.讨论 | 第44-46页 |
| 实验二 羊种布鲁氏菌感染的巨噬细胞中IL-6 对IFN-γ 诱导的自噬影响 | 第46-55页 |
| 摘要 | 第46页 |
| 1.实验材料与方法 | 第46-49页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·巨噬细胞和菌株 | 第46-47页 |
| ·实验主要试剂 | 第47页 |
| ·实验主要仪器和设备 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·ELISA双抗夹心法检测布鲁氏菌感染的巨噬细胞中细胞因子IL-6 | 第47-48页 |
| ·激光共聚焦检测自噬特异性标签GFP-LC3的荧光颗粒 | 第48-49页 |
| ·RT-qPCR检测自噬相关基因Atg5与Atg7转录水平 | 第49页 |
| ·统计学分析 | 第49页 |
| 2.结果 | 第49-53页 |
| ·布鲁氏菌 16M侵染小鼠巨噬细胞细胞因子IL-6 表达量 | 第49-50页 |
| ·激光共聚焦检测自噬特异性标签GFP-LC3荧光颗粒数 | 第50页 |
| ·RT-qPCR检测IFN-γ 和IL-6 对细胞中自噬相关蛋白的转录水平影响 | 第50-53页 |
| 3.讨论 | 第53-55页 |
| 全文小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 个人简介 | 第63-64页 |
| 导师评阅表 | 第64页 |
