| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 第一部分 信号肽置换提高人凝血因子FVII的分泌表达 | 第17-38页 |
| 1 材料 | 第17-20页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| ·质粒、感受态及细胞 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·主要试剂配制 | 第18-19页 |
| ·引物 | 第19-20页 |
| 2 方法 | 第20-31页 |
| ·引物设计及合成 | 第20页 |
| ·基因片段的制备 | 第20-26页 |
| ·感受态DH5a的制备 | 第26-27页 |
| ·连接与转化 | 第27-28页 |
| ·重组载体阳性克隆的筛选 | 第28-29页 |
| ·重组表达载体的转染 | 第29-30页 |
| ·分泌表达的检测 | 第30-31页 |
| ·分泌表达效率分析 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-35页 |
| ·pAdTrack-CMV-信号肽-FVII成熟肽重组载体的构建 | 第31-32页 |
| ·pAdTrack-CMV-FVII完全肽重组载体的构建 | 第32-33页 |
| ·pAdTrack-CMV-信号肽-FVII转染效率 | 第33-34页 |
| ·不同信号肽引导FVII分泌表达的差异 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 5 小结 | 第37-38页 |
| 第二部分 无血清培养对外源基因在动物细胞表达的影响 | 第38-51页 |
| 1 材料 | 第38-41页 |
| ·主要拭剂 | 第38页 |
| ·细胞、病毒和质粒 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·主要试剂配制 | 第39-41页 |
| 2 方法 | 第41-44页 |
| ·细胞的复苏与传代培养 | 第41页 |
| ·重组腺病毒Ad-GFP的扩增、纯化 | 第41-43页 |
| ·使用绿色荧光标记法测定重组腺病毒Ad-GFP的滴度 | 第43页 |
| ·CHO细胞、L02细胞、PC3细胞的接种铺板及换液接毒 | 第43-44页 |
| ·绿色荧光观察 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-48页 |
| ·扩增重组腺病毒Ad-GFP | 第44-45页 |
| ·重组腺病毒Ad-GFP的纯化及滴度测定 | 第45页 |
| ·观察绿色荧光并判断无血清培养对蛋白表达的影响 | 第45-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 5 小结 | 第50-51页 |
| 总结 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 缩略词 | 第59-60页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
