| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1 艾滋病毒及其研究概述 | 第12-15页 |
| ·艾滋病毒概述 | 第12页 |
| ·艾滋病毒的研究 | 第12-13页 |
| ·HIV病毒的结构 | 第12页 |
| ·HIV基因组结构和功能 | 第12-13页 |
| ·抗HIV药物的研究 | 第13-15页 |
| ·逆转录酶抑制剂 | 第14页 |
| ·蛋白酶抑制剂 | 第14页 |
| ·病毒入胞抑制剂 | 第14页 |
| ·整合酶抑制剂 | 第14-15页 |
| 2 Nef及其研究概述 | 第15-18页 |
| ·Nef的结构 | 第15-16页 |
| ·Nef的功能 | 第16-18页 |
| ·Nef对CD4的影响 | 第16页 |
| ·Nef介导CD28的下调 | 第16页 |
| ·Nef介导MHC的下调 | 第16-17页 |
| ·Nef干扰病毒粒子的复制能力和感染性的影响 | 第17页 |
| ·Nef对细胞凋亡的影响 | 第17-18页 |
| 3 酵母双杂交系统概述 | 第18-22页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第18-19页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第19-20页 |
| ·在蛋白质组中的研究 | 第19页 |
| ·制作蛋白质相互作用的图谱 | 第19页 |
| ·在病毒学中的研究 | 第19-20页 |
| ·在细胞信号转导中的应用 | 第20页 |
| ·筛选抗病毒药物 | 第20页 |
| ·酵母双杂交系统的优缺点 | 第20-22页 |
| ·酵母双杂交系统的优点 | 第20-21页 |
| ·酵母双杂交系统的局限性 | 第21-22页 |
| ·酵母双杂交系统的延伸 | 第22页 |
| ·酵母单杂交系统 | 第22页 |
| ·酵母三杂交系统 | 第22页 |
| ·酵母反向双杂交系统 | 第22页 |
| 4 本研究的目的和内容 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-50页 |
| 1 实验材料 | 第24-32页 |
| ·菌株、细胞和质粒 | 第24-28页 |
| ·pGBKT7载体 | 第24-25页 |
| ·pGADT7-RecT载体 | 第25-26页 |
| ·pGBKT7-53载体 | 第26页 |
| ·pGBKT7-Lam载体 | 第26-27页 |
| ·pACT2载体 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·核酸酶类 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·生化试剂 | 第29页 |
| ·试剂盒 | 第29页 |
| ·主要试剂的配制 | 第29-31页 |
| ·酵母双杂交主要试剂配制 | 第29-31页 |
| ·SDS-PAGE电泳试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31-32页 |
| ·主要软件 | 第32页 |
| 2 实验方法 | 第32-50页 |
| ·克隆目的基因Nef | 第32-35页 |
| ·pNL4-3质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增目的基因Nef | 第33-34页 |
| ·对PCR扩增产物电泳分析 | 第34-35页 |
| ·PCR的产物回收 | 第35页 |
| ·目的基因Nef和载体pGBKT7的双酶切反应 | 第35-38页 |
| ·目的基因Nef的酶切反应 | 第35-36页 |
| ·pGBKT7载体的酶切反应 | 第36-37页 |
| ·目的基因Nef的酶切片段和载体pGBKT7的酶切片段进行连接 | 第37页 |
| ·制备感受态细胞大肠杆菌DH5α | 第37-38页 |
| ·连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α | 第38页 |
| ·重组质粒的提取以及阳性克隆的验证 | 第38-40页 |
| ·重组质粒的提取 | 第38-39页 |
| ·阳性克隆的验证 | 第39-40页 |
| ·酵母菌株AH109以及Y187表型的确定 | 第40-41页 |
| ·诱饵蛋白pGBKT7-Nef的检测 | 第41-44页 |
| ·制备酵母AH109感受态细胞 | 第41页 |
| ·pGBKT7-Nef质粒转化酵母AH109 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE样本的制备 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE电泳凝胶的制备以及电泳 | 第42-43页 |
| ·转膜 | 第43-44页 |
| ·免疫反应以及检测 | 第44页 |
| ·诱饵蛋白pGBKT7-Nef的毒性检测和自激活性检测 | 第44-45页 |
| ·诱饵蛋白pGBKT7-Nef的毒性检测 | 第44页 |
| ·诱饵蛋白pGBKT7-Nef的自激活性检测 | 第44-45页 |
| ·筛选与诱饵蛋白pGBKT7-Nef相互作用的蛋白 | 第45-50页 |
| ·酵母菌株AH109的活化 | 第46页 |
| ·诱饵质粒pGBKT7-Nef的转入 | 第46-47页 |
| ·文库质粒的转化 | 第47页 |
| ·蓝白斑的鉴定 | 第47-48页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第48-49页 |
| ·酵母质粒转化感受态大肠杆菌DH5α | 第49页 |
| ·测序 | 第49页 |
| ·阳性克隆序列分析 | 第49-50页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第50-62页 |
| 1 结果 | 第50-60页 |
| ·目的基因Nef的扩增和诱饵载体pGBKT7-Nef的构建 | 第50-51页 |
| ·HIV-1 Nef基因的扩增结果 | 第50页 |
| ·重组质粒pGBKT7-Nef的构建以及鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·酵母菌株AH109和Y187表型的确定结果 | 第51-52页 |
| ·诱饵蛋白pGBKT7-Nef的表达结果 | 第52-53页 |
| ·诱饵蛋白pGBKT7-Nef的毒性检测结果 | 第53页 |
| ·诱饵蛋白pGBKT7-Nef自激活性的检测结果 | 第53-54页 |
| ·酵母双杂交筛选结果 | 第54-56页 |
| ·酵母菌株AH109的活化结果 | 第54页 |
| ·诱饵质粒pGBKT7-Nef的转入 | 第54-55页 |
| ·文库质粒的转化结果 | 第55页 |
| ·蓝白斑的鉴定结果 | 第55-56页 |
| ·测序和同源性对比结果 | 第56-60页 |
| 2 讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
