| 附件 | 第1-5页 |
| 缩略词 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-28页 |
| 第一章 白叶枯病菌蛋白PXO_03968研究进展 | 第15-16页 |
| 第二章 蛋白酶的种类及应用 | 第16-19页 |
| 1 蛋白酶的种类 | 第16-17页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶 | 第16页 |
| ·丝氨酸蛋白酶 | 第16-17页 |
| ·金属蛋白酶 | 第17页 |
| ·天门冬氨酸蛋白酶 | 第17页 |
| ·苏氨酸蛋白酶 | 第17页 |
| 2 蛋白酶的功能及应用 | 第17-19页 |
| ·蛋白酶的生理功能 | 第17-18页 |
| ·蛋白酶的应用 | 第18-19页 |
| 第三章 蛋白活性检测方法 | 第19-26页 |
| 1 均相检测蛋白酶活性 | 第20-24页 |
| ·化学淬灭染料监测荧光强度的变化 | 第20-21页 |
| ·荧光共振能量转移 | 第21-22页 |
| ·双标签淬灭检测荧光强度变化 | 第22-23页 |
| ·荧光偏振分析(FP) | 第23-24页 |
| 2 基于分离的活性检测试验 | 第24页 |
| 3 改进型蛋白酶活性测定方法 | 第24-26页 |
| 第三章 研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 技术路线 | 第27-28页 |
| 第二部分 研究内容 | 第28-70页 |
| 第一章 白叶枯外泌多肽的克隆表达及蛋白酶检测器的构建 | 第28-50页 |
| 1 前言 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-45页 |
| ·酶与生化试剂 | 第29-30页 |
| ·菌种与载体 | 第30页 |
| ·pMAL-c2E-PXO_03968,C+F+Y,C+M+Y质粒构建 | 第30-40页 |
| ·CFP和YFP,PXO_03968基因引物设计 | 第31-32页 |
| ·PXO_03968基因克隆 | 第32-35页 |
| ·CFP和YFP,PXO_03968基因克隆载体的构建 | 第35-36页 |
| ·DH5α或者BL21感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·PXO_03968基因转化 | 第36-37页 |
| ·菌液保存及菌液PCR验证 | 第37-38页 |
| ·CFP和YFP,PXO_03968基因片段的双酶切 | 第38-39页 |
| ·CFP和YFP,PXO_03968基因表达载体构建 | 第39-40页 |
| ·MBP-PXO_03968融合蛋白诱导,表达纯化 | 第40-42页 |
| ·MBP-PXO_03968融合蛋白诱导 | 第40页 |
| ·MBP-PXO_03968融合蛋白诱导蛋白纯化 | 第40-42页 |
| ·透析袋前处理 | 第42页 |
| ·蛋白透析 | 第42页 |
| ·C+F+Y,C+M+Y蛋白纯化 | 第42-43页 |
| ·蛋白质荧光检测 | 第43-44页 |
| ·MBP-PXO_03968融合蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| ·所需试剂的配制 | 第44-45页 |
| ·根据测出数据蛋白浓度计算 | 第45页 |
| 3 实验结果 | 第45-49页 |
| ·pMAL-PXO_03968,C+M+Y和C+F+Y质粒的PCR扩增 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测MBP-PXO_03968融合蛋白质的诱导表达及纯化 | 第46-49页 |
| ·MBP-PXO_03968融合蛋白质诱导表达及纯化 | 第46-48页 |
| ·C+M+Y和C+F+Y融合蛋白诱导表达及纯化 | 第48-49页 |
| ·荧光检测 | 第49页 |
| ·蛋白质定量 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第二章 白叶枯病菌胞外蛋白质分离及蛋白酶活性检测 | 第50-70页 |
| 1 前言 | 第50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-60页 |
| ·生化试剂与仪器 | 第50页 |
| ·菌种 | 第50页 |
| ·白叶枯病菌的培养 | 第50-52页 |
| ·PS培养基的配置 | 第51页 |
| ·白叶枯病菌活化及培养 | 第51-52页 |
| ·蛋白酶活性检测 | 第52页 |
| ·蛋白质质谱分析 | 第52页 |
| ·pMAL-c2e载体蛋白酶相关载体构建 | 第52-56页 |
| ·比较同源性预测蛋白酶 | 第52-54页 |
| ·根据质谱结果预测蛋白酶 | 第54页 |
| ·白叶枯病菌的基因组提取 | 第54-55页 |
| ·设计PCR程序 | 第55-56页 |
| ·蛋白酶系列载体构 | 第56页 |
| ·将测序正确的结果载体 | 第56页 |
| ·蛋白酶系列的诱导,纯化以及表达 | 第56-57页 |
| ·菌种培养及诱导 | 第56-57页 |
| ·蛋白质纯化 | 第57页 |
| ·蛋白活性检测 | 第57页 |
| ·利用C+M+Y检测预测蛋白酶活性 | 第57页 |
| ·利用纯化的MBP-PXO_03968蛋白检测酶活 | 第57页 |
| ·蛋白质N端测序 | 第57-60页 |
| ·仪器及试剂 | 第57-58页 |
| ·转膜过程 | 第58-60页 |
| ·条带测序 | 第60页 |
| 3 实验结果 | 第60-69页 |
| ·利用C+M+Y和MBP-PXO 03968蛋白检测蛋白酶活性 | 第60-61页 |
| ·蛋白酶的预测结果 | 第61-64页 |
| ·大于30 KDa组分鉴定 | 第61-62页 |
| ·同源性比较预测蛋白酶 | 第62-64页 |
| ·预测蛋白酶的诱导表达 | 第64-65页 |
| ·利用C+M+Y检测器检测预测蛋白酶活性 | 第65-67页 |
| ·利用纯化的MBP-PXO_03968融合蛋白检测酶活 | 第67页 |
| ·N端测序结果 | 第67-69页 |
| 4 讨论 | 第69-70页 |
| 结论与展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
