| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-48页 |
| ·结核病的危害与困境 | 第16-17页 |
| ·结核病的发病机理 | 第17-20页 |
| ·致病菌与传播方式 | 第17-18页 |
| ·发病机理 | 第18-20页 |
| ·MTB的遗传学基础 | 第20-21页 |
| ·MTB重要致病因子 | 第21-28页 |
| ·脂和脂肪酸代谢基因 | 第21-22页 |
| ·氨基酸和嘌呤合成基因 | 第22-23页 |
| ·金属摄取基因 | 第23页 |
| ·厌氧呼吸和氧化压力蛋白 | 第23-24页 |
| ·转录调控因子 | 第24-25页 |
| ·响应调节因子 | 第25-26页 |
| ·其它毒力因子 | 第26-28页 |
| ·MTB潜伏感染与休眠 | 第28-29页 |
| ·潜伏感染与休眠 | 第28页 |
| ·Wayne厌氧模型 | 第28-29页 |
| ·三元信号系统DosR/DosS/DosT与休眠调控 | 第29-36页 |
| ·DosR系统的发现和组成 | 第29-33页 |
| ·有氧呼吸与休眠程序 | 第33页 |
| ·氧气和氧化还原压力感应 | 第33页 |
| ·DosR系统作用机理 | 第33-35页 |
| ·休眠程序在巨噬细胞和动物感染中的作用 | 第35-36页 |
| ·细菌核酸类胞内二级信使 | 第36-38页 |
| ·C-di-GMP信号转导 | 第38-46页 |
| ·C-di-GMP合成与降解 | 第40页 |
| ·C-di-GMP调控单元的信号输入 | 第40-41页 |
| ·C-di-GMP受体介导信号传递 | 第41-44页 |
| ·c-di-GMP信号转导的靶标和受其影响的胞内过程 | 第44-45页 |
| ·GGDEF和EAL结构域蛋白的多样性 | 第45页 |
| ·C-di-GMP控制单元的时空隔离 | 第45页 |
| ·酶学失活的GGDEF和EAL蛋白 | 第45-46页 |
| ·本课题的研究目的 | 第46页 |
| ·本课题研究的技术路线 | 第46-48页 |
| 第二章 环二鸟苷酸信号转导调控结核杆菌休眠、生物膜发育和毒力 | 第48-102页 |
| ·引言 | 第48-49页 |
| ·实验材料与方法 | 第49-70页 |
| ·实验菌株与载体 | 第49-52页 |
| ·实验所用引物 | 第52-55页 |
| ·试剂 | 第55-56页 |
| ·培养基 | 第56-57页 |
| ·主要仪器及材料 | 第57-58页 |
| ·实验用细胞和动物 | 第58页 |
| ·E.coli感受态细胞制备 | 第58页 |
| ·E.coli感受态热击转化 | 第58页 |
| ·MTB基因组提取 | 第58-59页 |
| ·基因敲除质粒构建 | 第59-60页 |
| ·基因回补质粒构建 | 第60页 |
| ·MTB电转化感受态细胞制备 | 第60-61页 |
| ·基因敲除质粒线性化 | 第61页 |
| ·基因敲除突变株构建 | 第61-62页 |
| ·敲除突变株的基因回补 | 第62-63页 |
| ·MTB RNA抽提 | 第63页 |
| ·Microarray分析 | 第63-64页 |
| ·生物信息学预测基因功能 | 第64页 |
| ·RNA逆转录 | 第64页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第64页 |
| ·THP细胞感染实验 | 第64-65页 |
| ·小鼠感染模型 | 第65页 |
| ·脾肺脏切片与HE染色 | 第65-66页 |
| ·DNA染色和荧光素酶活体染色 | 第66页 |
| ·生物膜形成 | 第66-67页 |
| ·MTB体外低氧生长模型 | 第67页 |
| ·NAD和NADH分析 | 第67-68页 |
| ·蛋白重组表达 | 第68页 |
| ·蛋白纯化 | 第68-69页 |
| ·c-di-GMP合成酶活性分析 | 第69页 |
| ·吡啶血色原分析 | 第69-70页 |
| ·实验结果 | 第70-93页 |
| ·生物信息学预测MTB中可能的c-di-GMP合成酶和降解酶 | 第70页 |
| ·Rv1354c和Rv1357c的重组表达 | 第70-71页 |
| ·Rv1354c和Rv1354-GG具有c-di-GMP合成酶活性 | 第71-72页 |
| ·GAF结构域感应氧化还原压力调控c-di-GMP合成活力 | 第72-74页 |
| ·c-di-GMP合成酶和降解酶基因敲除与回补 | 第74-76页 |
| ·c-di-GMP合成酶基因缺失不影响MTB正常生长 | 第76-77页 |
| ·全基因转录谱分析 | 第77-82页 |
| ·定量RT-PCR验证中后期培养物的休眠基因表达 | 第82页 |
| ·c-di-GMP调控MTB生物膜发育 | 第82-84页 |
| ·c-di-GMP合成酶缺失导致MTB的正常生长需消耗更多氧气 | 第84页 |
| ·胞内氧化还原平衡需要c-di-GMP合成酶 | 第84-85页 |
| ·c-di-GMP调控MTB休眠的存活和生长恢复能力 | 第85-86页 |
| ·c-di-GMP合成酶缺失引起低氧条件下休眠基因下调表达 | 第86-87页 |
| ·c-di-GMP受体预测 | 第87页 |
| ·H37Rv基因敲除突变株筛选 | 第87-88页 |
| ·基因敲除引起细胞免疫因子表达改变 | 第88-90页 |
| ·Rv1357c缺失导致小鼠脾肺炎症增强和感染后期细菌存活力严重下降 | 第90-92页 |
| ·Rv0195缺失导致MTB的小鼠致病力和感染后期细菌存活力严重下降 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-102页 |
| 参考文献 | 第102-118页 |
| 附录 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 博士在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第122页 |
| 发表论文 | 第122页 |
| 申请专利 | 第122页 |
| 主持项目 | 第122页 |
