| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 略缩语表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-23页 |
| ·抗冻蛋白的结构和起源 | 第11-12页 |
| ·抗冻蛋白的分类 | 第12-13页 |
| ·鱼类抗冻蛋白 | 第12-13页 |
| ·昆虫抗冻蛋白 | 第13页 |
| ·植物抗冻蛋白 | 第13页 |
| ·植物抗冻蛋白的研究 | 第13-17页 |
| ·植物的冷应激和冷耐受(10℃以下) | 第13-14页 |
| ·冷驯化植物与未驯化植物 | 第14-15页 |
| ·植物 ISPs 的双重作用 | 第15页 |
| ·植物 ISPs 的分子量与同源性 | 第15-16页 |
| ·抗冻蛋白的特性 | 第16-17页 |
| ·抗冻蛋白的生理功能和抗冻机制 | 第17-18页 |
| ·生理功能 | 第17页 |
| ·抗冻机制 | 第17-18页 |
| ·抗冻蛋白在生产实践中的应用 | 第18-20页 |
| ·在农业中的应用 | 第18-19页 |
| ·在食品工业中的应用 | 第19页 |
| ·在医学上的应用 | 第19页 |
| ·在鱼类上的应用 | 第19页 |
| ·在工业上的应用 | 第19-20页 |
| ·抗冻蛋白在应用上的安全性 | 第20页 |
| ·本课题的立题依据、重要意义及研究方法 | 第20-23页 |
| ·立题依据和重要意义 | 第20-21页 |
| ·研究方法 | 第21-23页 |
| 第二章 材料和方法 | 第23-35页 |
| ·实验材料 | 第23-27页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·溶液配方和配置 | 第24-26页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-35页 |
| ·黑麦草 LpIRI3 基因的实时定量 PCR | 第27-29页 |
| ·黑麦草 LpIRI3 基因的克隆 | 第29-32页 |
| ·表达载体的构建、原核表达及纯化 | 第32-34页 |
| ·抗冻蛋白的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 第三章 结果 | 第35-45页 |
| ·抗冻蛋白基因克隆载体 pAD-LpIRI3 的构建 | 第35-40页 |
| ·RNA 纯度和完整性鉴定 | 第35页 |
| ·黑麦草总 RNA 反转录结果 | 第35-36页 |
| ·黑麦草不同温度处理后荧光定量 PCR 扩增曲线和解链曲线 | 第36-37页 |
| ·LpIRI3 在黑麦草不同温度冷胁迫下的定量分析 | 第37-38页 |
| ·LpIRI3 在黑麦草不同生存条件下的定量分析 | 第38-39页 |
| ·克隆重组质粒 pAD-LpIRI3 的鉴定 | 第39页 |
| ·目的片段的测序鉴定 | 第39-40页 |
| ·抗冻蛋白基因表达载体 pGEX-IRI3 的构建和表达 | 第40-42页 |
| ·表达重组质粒 pGEX-4T1-GST-LpIRI3 的质粒 PCR 和双酶切鉴定 | 第40页 |
| ·GST 融合的 LpIRI3 蛋白的原核表达 | 第40-41页 |
| ·GST 融合的 LpIRI3 蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·Western Bolt 检测 LpIRI3 蛋白 | 第42页 |
| ·黑麦草抗冻蛋白的生物信息学分析 | 第42-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-49页 |
| ·实时定量 PCR | 第45页 |
| ·黑麦草 LpIRI3 的 PCR 克隆策略 | 第45-46页 |
| ·黑麦草抗冻蛋白基因序列 LpIRI3 与 GenBank 中报道的序列异同 | 第46页 |
| ·表达载体的选择 | 第46页 |
| ·克隆基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第47-49页 |
| 第五章 结论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-59页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第59-60页 |
