| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一部分 实验研究 | 第14-56页 |
| 第一章 Rheb基因过表达载体及干扰载体的构建 | 第14-26页 |
| 1. 材料 | 第14-15页 |
| ·主要仪器设备 | 第14-15页 |
| ·实验试剂与耗材 | 第15页 |
| ·实验材料 | 第15页 |
| 2. 方法 | 第15-20页 |
| ·Rheb基因的克隆 | 第15-16页 |
| ·Rheb表达载体的构建 | 第16页 |
| ·Rheb干扰载体的设计与合成 | 第16-18页 |
| ·质粒提取 | 第18页 |
| ·筛选高效干扰Rheb表达的miRNA载体 | 第18-20页 |
| 3 结果 | 第20-22页 |
| ·Rheb基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·Rheb过表达载体的构建与鉴定 | 第21页 |
| ·筛选高效的Rheb干扰载体 | 第21-22页 |
| 4 讨论 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-26页 |
| 第二章 Rheb对骨骼肌卫星细胞的影响 | 第26-52页 |
| 第一节 Rheb过表达对骨骼肌卫星细胞的影响 | 第27-38页 |
| 1. 材料 | 第27-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·实验试剂与耗材 | 第27-28页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·溶液配制 | 第28-29页 |
| 2. 方法 | 第29-32页 |
| ·细胞的分离和培养 | 第29-30页 |
| ·Rheb过表达细胞的转染效率、细胞的电子体积及细胞周期检测 | 第30页 |
| ·Real-Time PCR检测Rheb过表达肌卫星细胞内肌发育相关基因的表达 | 第30-31页 |
| ·Western blot检测Rheb、MyoG的蛋白表达 | 第31-32页 |
| 3. 结果 | 第32-38页 |
| ·转Rheb过表达载体骨骼肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞的培养 | 第32-34页 |
| ·Rheb过表达细胞的转染效率及肌卫星细胞的电子体积检测 | 第34页 |
| ·Rheb过表达骨骼肌肉细胞的细胞周期检测 | 第34-35页 |
| ·Rheb过表达肌卫星细胞中肌发育相关基因的表达水平检测 | 第35-36页 |
| ·Western blot检测肌发育相关基因的表达变化 | 第36-38页 |
| 第二节 Rheb消减对骨骼肌卫星细胞的影响 | 第38-47页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-39页 |
| ·检测转miRNA载体骨骼肌卫星细胞的细胞周期、电子体积及转染效率 | 第38页 |
| ·Real-Time PCR检测Rheb表达降低后骨骼肌卫星细胞中肌发育相关基因的表达 | 第38页 |
| ·Western blot检测Rheb表达降低后骨骼肌卫星细胞中肌发育相关基因的影响 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-44页 |
| ·转基因骨骼肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞的培养 | 第39-40页 |
| ·转miRNA骨骼肌卫星细胞的转染效率及电子体积检测 | 第40-41页 |
| ·转miRNA骨骼肌卫星细胞的细胞周期检测 | 第41-42页 |
| ·Rheb表达降低后肌卫星细胞中肌发育相关基因的表达水平 | 第42-43页 |
| ·Western blot检测Rheb、MyoG的蛋白表达 | 第43-44页 |
| 4. 讨论 | 第44-47页 |
| ·绒山羊骨骼肌卫星细胞与胎儿成纤维细胞的转染效率差异 | 第44页 |
| ·Rheb对骨骼肌卫星细胞周期的影响 | 第44-45页 |
| ·Rheb对肌发育相关基因的影响 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
| 第二部分 文献综述 | 第56-67页 |
| 1 Rheb的结构 | 第56页 |
| 2 Rheb的功能 | 第56-60页 |
| ·SC1/2负调控Rheb | 第56-57页 |
| ·Rheb正调控mTOR信号通路 | 第57-58页 |
| ·Rheb参与细胞周期调控 | 第58-59页 |
| ·Rheb促进脂肪细胞分化 | 第59页 |
| ·Rheb影响心肌肉卫星细胞生长 | 第59-60页 |
| ·Rheb负调控骨骼肌生成 | 第60页 |
| 3 研究意义及展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读硕士学位期间已发表的学术论文 | 第68页 |
