| 符号说明 | 第1-13页 |
| 中文摘要 | 第13-16页 |
| Abstract | 第16-19页 |
| 1 文献综述 | 第19-57页 |
| ·辣椒疫霉及其全基因组 | 第19-25页 |
| ·辣椒疫病简介 | 第19-21页 |
| ·辣椒疫病发病原因总结 | 第21页 |
| ·土壤因素 | 第21页 |
| ·温、湿度因素 | 第21页 |
| ·其它因素 | 第21页 |
| ·辣椒疫病防治策略 | 第21-23页 |
| ·栽培防治 | 第22页 |
| ·化学防治 | 第22页 |
| ·生物防治 | 第22-23页 |
| ·防治中存在的问题 | 第23-24页 |
| ·辣椒疫霉基因组学研究进展 | 第24-25页 |
| ·生物塑料及其发展 | 第25-28页 |
| ·传统塑料产业发展受到限制 | 第25-26页 |
| ·生物塑料及其替代传统塑料的优势 | 第26-27页 |
| ·塑料的分类 | 第26页 |
| ·生物塑料及其分类 | 第26-27页 |
| ·生物塑料的优点 | 第27页 |
| ·生物塑料的开发及应用 | 第27页 |
| ·面临的问题与挑战 | 第27-28页 |
| ·价格高昂 | 第27页 |
| ·供应有限 | 第27页 |
| ·观念问题 | 第27-28页 |
| ·其它问题 | 第28页 |
| ·中国的生物塑料产业发展 | 第28页 |
| ·生物塑料之聚羟基脂肪酸酯（Polyhydroxyalkanoate，PHA） | 第28-34页 |
| ·聚羟基脂肪酸酯（PHA）是一种新型的生物塑料 | 第28-29页 |
| ·PHA 的结构与合成 | 第29-31页 |
| ·PHA 的性能 | 第31-32页 |
| ·一般性能 | 第31页 |
| ·生物降解性能 | 第31页 |
| ·PHA 的缺点 | 第31-32页 |
| ·PHA 的应用 | 第32-33页 |
| ·塑料及农业领域 | 第32页 |
| ·医药领域 | 第32-33页 |
| ·其他领域 | 第33页 |
| ·存在的问题与挑战 | 第33-34页 |
| ·PHA 合成相关酶类研究 | 第34-40页 |
| ·PHA 在微生物及植物体内的合成研究 | 第34-35页 |
| ·PHA 的合成过程受多种酶调控 | 第35-37页 |
| ·PHA 的合成过程及作用机制 | 第37-38页 |
| ·R 型水合酶（R-hydratase）是 PHA 合成过程中一种重要酶 | 第38-40页 |
| ·MaoC 是与 PHA 生物合成相关的一种重要新型 R 型水合酶 | 第40-44页 |
| ·MaoC 可以合成 PHA 的前体物质 | 第40-41页 |
| ·MaoC 及其同源酶类酶学研究 | 第41页 |
| ·MaoC 及其同源酶类结构生物学研究 | 第41-44页 |
| ·蛋白质晶体学及结构生物学 | 第44-55页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第45-48页 |
| ·表达载体的类型 | 第45页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第45-48页 |
| ·蛋白质晶体学重要性 | 第48页 |
| ·蛋白质晶体学介绍 | 第48-52页 |
| ·蛋白质 X 射线晶体学的一般过程 | 第49-50页 |
| ·蛋白质晶体生长的原理及影响因素 | 第50页 |
| ·蛋白质晶体生长的方法 | 第50-52页 |
| ·蛋白质结构解析简介 | 第52-54页 |
| ·结构生物学发展及现状 | 第54-55页 |
| ·研究目的及意义 | 第55-57页 |
| 2 材料与方法 | 第57-78页 |
| ·实验材料 | 第57-60页 |
| ·载体与菌株 | 第57页 |
| ·酶、生化试剂及试剂盒等 | 第57页 |
| ·溶液配制 | 第57-59页 |
| ·贮存液配制 | 第57-58页 |
| ·其它溶液配制 | 第58-59页 |
| ·实验仪器及耗材 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-78页 |
| ·MaoC 蛋白结构分析 | 第60页 |
| ·目的基因片段的克隆及原核表达载体构建 | 第60-65页 |
| ·构建突变体引物设计 | 第60-62页 |
| ·突变体 PCR 扩增及阳性克隆鉴定 | 第62-63页 |
| ·原核表达载体 pET-28a 质粒提取 | 第63-64页 |
| ·突变体原核表达重组载体的构建与鉴定 | 第64-65页 |
| ·突变体重组蛋白的表达 | 第65-67页 |
| ·目的蛋白的试表达 | 第65-66页 |
| ·蛋白表达条件优化 | 第66页 |
| ·表达蛋白的大量表达 | 第66-67页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第67-69页 |
| ·亲和层析纯化 | 第67-68页 |
| ·离子交换层析纯化 | 第68页 |
| ·分子排阻层析纯化 | 第68-69页 |
| ·重组蛋白验证及酶活检测 | 第69-72页 |
| ·重组蛋白的透析 | 第69-70页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第70页 |
| ·重组蛋白的圆二色性分析 | 第70-71页 |
| ·重组蛋白的 Western blotting 杂交验证 | 第71页 |
| ·重组蛋白的酶活测定 | 第71-72页 |
| ·失活突变体重组蛋白与底物共结晶 | 第72-74页 |
| ·突变体纯蛋白的获取 | 第72-73页 |
| ·突变体纯蛋白与底物共结晶 | 第73页 |
| ·晶体优化 | 第73-74页 |
| ·晶体数据收集与处理 | 第74-75页 |
| ·晶体 X 衍射数据收集 | 第74-75页 |
| ·衍射数据处理 | 第75页 |
| ·结构解析与修正 | 第75-78页 |
| ·分子置换法解析结构 | 第76页 |
| ·结构修正 | 第76-78页 |
| 3 结果与分析 | 第78-119页 |
| ·MaoC 蛋白结构分析 | 第78-84页 |
| ·氨基酸序列同源性分析 | 第78-79页 |
| ·MaoC 单体结构描述 | 第79-82页 |
| ·MaoC 二聚体结构描述 | 第82-84页 |
| ·MaoC 与底物 Crotonyl-CoA 模拟结合复合结构描述 | 第84页 |
| ·MaoC 活性位点分析与验证 | 第84-91页 |
| ·MaoC 与其同源结构比对分析 | 第84-86页 |
| ·MaoC 活性位点突变与突变体活性检测 | 第86-88页 |
| ·MaoC 及其突变体验证 | 第88-91页 |
| ·MaoC 突变体测序验证 | 第88-89页 |
| ·圆二色性 CD 分析 | 第89-90页 |
| ·Western blotting 杂交验证 | 第90页 |
| ·分子排阻层析验证 | 第90-91页 |
| ·MaoC 两个失活突变体与底物共结晶 | 第91-99页 |
| ·失活突变体 H199Q 与底物 Crotonyl-CoA 共结晶 | 第91-95页 |
| ·H199Q 纯蛋白的获得 | 第91-93页 |
| ·H199Q 结晶条件初筛 | 第93-94页 |
| ·H199Q 结晶条件优化 | 第94-95页 |
| ·H199Q 蛋白晶体 X 衍射分析 | 第95页 |
| ·失活突变体 D194N 与底物 Crotonyl-CoA 共结晶 | 第95-98页 |
| ·D194N 纯蛋白的获得 | 第95页 |
| ·D194N 结晶条件初筛 | 第95-96页 |
| ·D194N 结晶条件优化 | 第96-97页 |
| ·D194N 蛋白晶体 X 衍射分析 | 第97页 |
| ·D194N 蛋白晶体 X 衍射数据收集 | 第97-98页 |
| ·失活突变体 D194N 结构解析 | 第98-99页 |
| ·二聚化作用对 MaoC 活性的影响 | 第99-106页 |
| ·参与 MaoC 二聚化作用的氨基酸 | 第99-100页 |
| ·MaoC 去二聚化作用突变体的获得 | 第100-103页 |
| ·去二聚化作用突变策略 | 第100-101页 |
| ·去二聚化作用突变体测序验证 | 第101-102页 |
| ·去二聚化作用突变体纯化 | 第102-103页 |
| ·突变体去二聚化作用效果验证 | 第103-104页 |
| ·去二聚化作用突变体活性检测 | 第104-106页 |
| ·以结构为基础的 MaoC 酶工程改造 | 第106-119页 |
| ·关键位点定点突变对 MaoC 酶活性影响 | 第106-113页 |
| ·定点突变氨基酸位点的选择 | 第106-109页 |
| ·突变体测序验证 | 第109-111页 |
| ·突变体表达与纯化 | 第111-112页 |
| ·突变体酶活检测 | 第112-113页 |
| ·删除片段突变对 MaoC 酶活性影响 | 第113-119页 |
| ·删除片段的选择 | 第113-115页 |
| ·突变体测序验证 | 第115页 |
| ·突变体表达与纯化 | 第115-116页 |
| ·突变体酶活检测 | 第116-119页 |
| 4 结论与讨论 | 第119-125页 |
| ·MaoC 生物学功能 | 第119页 |
| ·MaoC 三维结构特性 | 第119-121页 |
| ·活性中心及催化机理 | 第121-122页 |
| ·失活突变体与底物共结晶 | 第122页 |
| ·二聚化作用对 MaoC 活性的影响 | 第122-123页 |
| ·以结构为基础的 MaoC 酶工程改造 | 第123-125页 |
| 5 博士期间其它工作小结 | 第125-139页 |
| 参考文献 | 第139-153页 |
| 附录 | 第153-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
| 论文发表情况 | 第155-156页 |
| 博士学位论文内容简介及自评 | 第156页 |
