| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 主要缩略语英文索引 | 第13-15页 |
| 绪论 | 第15-16页 |
| 第一部分 延胡索酸水合酶(FH)的多克隆抗体制备和功能研究 | 第16-38页 |
| 引言 | 第16页 |
| 1 材料 | 第16-18页 |
| ·本实验所需仪器 | 第16-17页 |
| ·实验试剂 | 第17-18页 |
| ·菌种及细胞 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18-25页 |
| ·抗原肽段的选择 | 第18页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·原核表达质粒pGEX-4T-2/FH(400-510)的构建及其验证 | 第18-19页 |
| ·GST-FH(400-510)融合蛋白的表达、纯化和鉴定 | 第19-23页 |
| ·鼠抗人GST-FH融合蛋白抗体的制备 | 第23页 |
| ·western-blot分析抗体特异性并分析FH在不同组织的分布 | 第23-24页 |
| ·免疫共沉淀实验检测抗体特异性研究FH相互作用蛋白 | 第24-25页 |
| 3 结果 | 第25-35页 |
| ·FH抗原肽段分析结果 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增及重组质粒pGEX-4T-2/FH构建和鉴定 | 第26-28页 |
| ·GST-FH(400-510)1的表达、纯化及验证 | 第28-30页 |
| ·FH在小鼠体内的表达分析 | 第30-31页 |
| ·鼠抗GST-FH(400-510)的免疫共沉淀实验结果 | 第31-32页 |
| ·FH相互作用蛋白的质谱分析结果 | 第32-35页 |
| 讨论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 第二部分 甲基化CpG结合蛋白1(MBD1)的多抗制备和功能验证 | 第38-57页 |
| 引言 | 第38-39页 |
| 材料与方法 | 第39-53页 |
| 1 材料 | 第39页 |
| ·本实验所需仪器 | 第39页 |
| ·本实验所需试剂 | 第39页 |
| ·载体 | 第39页 |
| ·菌种及细胞 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-44页 |
| ·MBD1抗原选择及引物设计 | 第39-40页 |
| ·原核表达质粒pGEX-4T-2/MBD1(383-455),pMAL-C5X/MBD1(227-300),pMAL-C5X/MBD1(1-70)构建及验证 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白的表达、纯化和鉴定 | 第41-43页 |
| ·MBD1多克隆抗体的制备,方法同第一部分2.5 | 第43页 |
| ·western-blot分析抗体功能 | 第43-44页 |
| ·免疫共沉淀实验验证抗体功能 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-53页 |
| ·PCR扩增及重组质粒的构建和鉴定结果 | 第44-48页 |
| ·GST-MBD1(383-455)融合蛋白的表达、纯化和鉴定结果 | 第48页 |
| ·MBP-MBD1(1-70)融合蛋白的表达、纯化和鉴定结果 | 第48-49页 |
| ·MBP-MBD1(227-300)融合蛋白的表达、纯化和鉴定结果 | 第49-50页 |
| ·western-blot分析抗体特异性 | 第50-51页 |
| ·免疫共沉淀实验的western-blot结果 | 第51-52页 |
| ·三种抗体的IP样品的考马斯亮蓝染色结果 | 第52-53页 |
| 讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 第三部分 文献研究 | 第57-66页 |
| 1 延胡索酸水合酶的结构 | 第57-58页 |
| 2 延胡索酸水合酶的遗传学特性 | 第58-60页 |
| 3 延胡索酸水合酶和延胡索酸水合酶缺乏症 | 第60页 |
| 4 延胡索酸水合酶与肿瘤的关系 | 第60-61页 |
| 5 延胡索酸水合酶致病机制 | 第61-62页 |
| 6 延胡索酸水合酶蛋白质相互作用研究 | 第62页 |
| 7 结语与展望 | 第62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 附件 | 第66-70页 |
| 1 主要溶液的配制方法 | 第66-67页 |
| 2 感受态的制备 | 第67-70页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
