| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-12页 |
| 第2章 材料与方法 | 第12-22页 |
| ·实验材料 | 第12-14页 |
| ·实验动物 | 第12页 |
| ·细胞系 | 第12页 |
| ·基本材料 | 第12页 |
| ·主要试剂 | 第12-13页 |
| ·主要仪器 | 第13页 |
| ·主要试剂的配制与储存 | 第13-14页 |
| ·实验方法与步骤 | 第14-21页 |
| ·实验分组 | 第14-15页 |
| ·原代 MEF 细胞的制备 | 第15页 |
| ·MEF 细胞的传代 | 第15页 |
| ·MEF 细胞的丝裂霉素 C 处理及冻存 | 第15-16页 |
| ·MEF 细胞的复苏及饲养层细胞的准备 | 第16页 |
| ·hESCs 的复苏及培养扩增 | 第16-17页 |
| ·hESCs 的冻存 | 第17-18页 |
| ·条件培养基制备 | 第18页 |
| ·hESCs 无饲养层条件培养基培养 | 第18页 |
| ·hESCs 无饲养层自制无血清培养 | 第18-19页 |
| ·hESCs 无饲养层改良无血清培养 | 第19页 |
| ·hESCs 克隆计数及克隆大小评估 | 第19页 |
| ·免疫组织化学法检测 | 第19-20页 |
| ·流式检测 | 第20页 |
| ·体外分化 | 第20-21页 |
| ·统计学分析 | 第21-22页 |
| 第3章 结果 | 第22-29页 |
| ·MEF 原代及经丝裂霉素 C 处理后的形态观察 | 第22页 |
| ·不同培养条件下 hESc 形态观察 | 第22-23页 |
| ·三组条件下克隆个数及大小百分数分析 | 第23-24页 |
| ·免疫荧光染色 | 第24-26页 |
| ·流式细胞术 | 第26-27页 |
| ·体外拟胚体形成 | 第27-29页 |
| 第4章 讨论 | 第29-35页 |
| ·hESCs 改良无血清无饲养层培养体系的成功建立 | 第30-32页 |
| ·改良无血清无饲养层培养体系成功维持 hESCs 生长的可能原因分析 | 第32-35页 |
| 第5章 结论与展望 | 第35-36页 |
| ·小结与结论 | 第35页 |
| ·展望 | 第35-36页 |
| 致谢 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-41页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第41-42页 |
| 综述 | 第42-50页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |