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鸡IL-15真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15的构建及对鸡免疫功能的影响

摘要第1-9页
文献综述第9-15页
 1 白细胞介素第9页
 2 白细胞介素15第9-13页
   ·IL-15的来源第9页
   ·IL-15的结构第9-10页
   ·IL-15的受体及信号转导第10页
   ·IL-15的生物学功能第10-12页
       ·刺激T细胞增殖、分化第10-11页
     ·对B细胞的作用第11页
     ·对NK细胞(自然杀伤细胞)的作用第11页
     ·对DC细胞(树突状细胞)的作用第11页
     ·对中性粒细胞的作用第11页
     ·对单核巨噬细胞的作用第11-12页
     ·其他生物学作用第12页
   ·IL-15与自身免疫性疾病第12页
   ·IL-15与肿瘤第12页
   ·IL-15与微生物感染第12-13页
   ·IL-15的发展前景第13页
 3 鸡白细胞介素15(ChIL-15)第13-15页
前言第15-16页
实验一 pcDNA3.1(+)-ChIL-15的构建第16-34页
 1 实验材料第16-19页
   ·实验材料第16页
   ·主要试剂的配置第16-18页
     ·琼脂糖凝胶的主要试剂配置第16页
     ·LB培养基主要试剂配置第16-17页
     ·大量提取质粒的主要试剂配置第17-18页
   ·主要仪器第18-19页
 2 实验方法第19-28页
   ·鸡脾脏总RNA的提取第19页
   ·反转录及PCR第19-20页
     ·反转录第19页
     ·PCR扩增鸡IL-15基因第19-20页
   ·PCR产物ChIL-15的回收第20-21页
     ·PCR产物电泳切胶第20-21页
     ·DNA目的条带的回收第21页
   ·ChIL-15与克隆载体pMD-18T的连接第21-25页
     ·ChIL-15与克隆载体pMD-18T的连接第21-22页
     ·LB液体培养基配置和LB固体培养基倒板第22页
     ·感受态菌的制备第22-23页
     ·重组质粒pMD18-T-ChIL-15的转化第23页
     ·重组质粒pMD18-T-ChIL-15的小量制备第23-24页
     ·重组质粒pMD18-T-ChIL-15的酶切鉴定第24页
     ·重组质粒pMD18-T-ChIL-15的序列测定第24-25页
   ·真核表达载体pcDNA3.1(+)的扩增及pcDNA3.1(+)-ChIL-15的构建第25-28页
     ·真核表达载体pcDNA3.1(+)的转化第25页
     ·载体pcDNA3.1(+)的小量制备第25-26页
     ·载体pcDNA3.1(+)的序列测定第26页
     ·表达载体pcDNA3.1(+)和重组质粒pMD-18T-ChIL-15的双酶切第26-27页
     ·表达载体pcDNA3.1(+)与目的片段ChIL-15的连接第27页
     ·连接产物pcDNA3.1(+)-ChIL-15的转化第27页
     ·重组表达质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15的鉴定第27-28页
     ·SDS碱裂解法大量制备质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15第28页
     ·聚乙二醇沉淀法纯化粗制质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15第28页
 3 结果与分析第28-32页
   ·鸡脾脏总RNA的提取结果第28-29页
   ·鸡IL-15基因的PCR结果第29页
   ·pMD18-T-ChIL-15质粒鉴定第29-32页
     ·pMD18-T-ChIL-15的阳性克隆鉴定第29-30页
     ·pMD18-T-ChIL-15质粒双酶切鉴定第30页
     ·pMD18-T-ChIL-15的序列测定结果第30-32页
   ·重组表达质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15的鉴定第32页
 4 讨论第32-34页
实验二 pcDNA3.1(+)-ChIL-15对鸡免疫功能的影响第34-46页
 1 实验材料第34-35页
   ·实验材料第34页
   ·主要试剂的配置第34-35页
   ·主要仪器第35页
 2 实验方法第35-37页
   ·动物分组及实验安排第35-36页
   ·鸡活性T、B淋巴细胞百分率的测定第36页
   ·血凝抑制(HI)试验第36页
   ·鸡肾型传染性支气管炎抗体的检测第36-37页
   ·法氏囊琼脂免疫扩散试验第37页
   ·免疫器官指数测定第37页
   ·攻毒方法第37页
   ·数据统计与处理第37页
 3 实验结果第37-44页
   ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对正常雏鸡外周血液中活性T、B淋巴细胞百分率的影响第37-39页
     ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对正常雏鸡外周血液中活性T淋巴细胞百分率的影响第37-38页
     ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对正常雏鸡外周血液中活性B淋巴细胞百分率的影响第38-39页
   ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对ND-HI抗体效价的影响第39-40页
   ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对IBV抗体效价的影响第40-41页
   ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对IBD抗体效价的影响第41-42页
   ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对脾脏系数的影响第42-43页
   ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对攻强毒NIBV(IBV-gray强毒株)雏鸡的影响第43-44页
 4 讨论第44-46页
结论第46-47页
参考文献第47-51页
Abstract第51-53页
附录第53-55页
致谢第55页

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