| 摘要 | 第1-9页 |
| 文献综述 | 第9-15页 |
| 1 白细胞介素 | 第9页 |
| 2 白细胞介素15 | 第9-13页 |
| ·IL-15的来源 | 第9页 |
| ·IL-15的结构 | 第9-10页 |
| ·IL-15的受体及信号转导 | 第10页 |
| ·IL-15的生物学功能 | 第10-12页 |
| ·刺激T细胞增殖、分化 | 第10-11页 |
| ·对B细胞的作用 | 第11页 |
| ·对NK细胞(自然杀伤细胞)的作用 | 第11页 |
| ·对DC细胞(树突状细胞)的作用 | 第11页 |
| ·对中性粒细胞的作用 | 第11页 |
| ·对单核巨噬细胞的作用 | 第11-12页 |
| ·其他生物学作用 | 第12页 |
| ·IL-15与自身免疫性疾病 | 第12页 |
| ·IL-15与肿瘤 | 第12页 |
| ·IL-15与微生物感染 | 第12-13页 |
| ·IL-15的发展前景 | 第13页 |
| 3 鸡白细胞介素15(ChIL-15) | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 实验一 pcDNA3.1(+)-ChIL-15的构建 | 第16-34页 |
| 1 实验材料 | 第16-19页 |
| ·实验材料 | 第16页 |
| ·主要试剂的配置 | 第16-18页 |
| ·琼脂糖凝胶的主要试剂配置 | 第16页 |
| ·LB培养基主要试剂配置 | 第16-17页 |
| ·大量提取质粒的主要试剂配置 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-28页 |
| ·鸡脾脏总RNA的提取 | 第19页 |
| ·反转录及PCR | 第19-20页 |
| ·反转录 | 第19页 |
| ·PCR扩增鸡IL-15基因 | 第19-20页 |
| ·PCR产物ChIL-15的回收 | 第20-21页 |
| ·PCR产物电泳切胶 | 第20-21页 |
| ·DNA目的条带的回收 | 第21页 |
| ·ChIL-15与克隆载体pMD-18T的连接 | 第21-25页 |
| ·ChIL-15与克隆载体pMD-18T的连接 | 第21-22页 |
| ·LB液体培养基配置和LB固体培养基倒板 | 第22页 |
| ·感受态菌的制备 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pMD18-T-ChIL-15的转化 | 第23页 |
| ·重组质粒pMD18-T-ChIL-15的小量制备 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pMD18-T-ChIL-15的酶切鉴定 | 第24页 |
| ·重组质粒pMD18-T-ChIL-15的序列测定 | 第24-25页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.1(+)的扩增及pcDNA3.1(+)-ChIL-15的构建 | 第25-28页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.1(+)的转化 | 第25页 |
| ·载体pcDNA3.1(+)的小量制备 | 第25-26页 |
| ·载体pcDNA3.1(+)的序列测定 | 第26页 |
| ·表达载体pcDNA3.1(+)和重组质粒pMD-18T-ChIL-15的双酶切 | 第26-27页 |
| ·表达载体pcDNA3.1(+)与目的片段ChIL-15的连接 | 第27页 |
| ·连接产物pcDNA3.1(+)-ChIL-15的转化 | 第27页 |
| ·重组表达质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15的鉴定 | 第27-28页 |
| ·SDS碱裂解法大量制备质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15 | 第28页 |
| ·聚乙二醇沉淀法纯化粗制质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15 | 第28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-32页 |
| ·鸡脾脏总RNA的提取结果 | 第28-29页 |
| ·鸡IL-15基因的PCR结果 | 第29页 |
| ·pMD18-T-ChIL-15质粒鉴定 | 第29-32页 |
| ·pMD18-T-ChIL-15的阳性克隆鉴定 | 第29-30页 |
| ·pMD18-T-ChIL-15质粒双酶切鉴定 | 第30页 |
| ·pMD18-T-ChIL-15的序列测定结果 | 第30-32页 |
| ·重组表达质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15的鉴定 | 第32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 实验二 pcDNA3.1(+)-ChIL-15对鸡免疫功能的影响 | 第34-46页 |
| 1 实验材料 | 第34-35页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·主要试剂的配置 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-37页 |
| ·动物分组及实验安排 | 第35-36页 |
| ·鸡活性T、B淋巴细胞百分率的测定 | 第36页 |
| ·血凝抑制(HI)试验 | 第36页 |
| ·鸡肾型传染性支气管炎抗体的检测 | 第36-37页 |
| ·法氏囊琼脂免疫扩散试验 | 第37页 |
| ·免疫器官指数测定 | 第37页 |
| ·攻毒方法 | 第37页 |
| ·数据统计与处理 | 第37页 |
| 3 实验结果 | 第37-44页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对正常雏鸡外周血液中活性T、B淋巴细胞百分率的影响 | 第37-39页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对正常雏鸡外周血液中活性T淋巴细胞百分率的影响 | 第37-38页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对正常雏鸡外周血液中活性B淋巴细胞百分率的影响 | 第38-39页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对ND-HI抗体效价的影响 | 第39-40页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对IBV抗体效价的影响 | 第40-41页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对IBD抗体效价的影响 | 第41-42页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对脾脏系数的影响 | 第42-43页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ChIL-15对攻强毒NIBV(IBV-gray强毒株)雏鸡的影响 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| Abstract | 第51-53页 |
| 附录 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
