| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号与缩略语说明 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-30页 |
| 1 荧光素酶简介 | 第12-13页 |
| ·萤火虫荧光素酶结构 | 第12-13页 |
| ·萤火虫荧光素酶催化发光的原理 | 第13页 |
| 2 萤火虫荧光素酶的研究历史及现状 | 第13-14页 |
| 3 萤火虫荧光素酶的稳定性 | 第14-16页 |
| 4 基因重组萤火虫荧光素酶在大肠杆菌中的表达 | 第16-18页 |
| ·表达载体的选择 | 第16-17页 |
| ·蛋白质的分离纯化 | 第17-18页 |
| 5 萤火虫荧光素酶的应用 | 第18-22页 |
| ·作为报告基因的应用 | 第18页 |
| ·研究蛋白质之间作用 | 第18页 |
| ·在医学上的应用 | 第18-19页 |
| ·在细胞活性分析中的应用 | 第19页 |
| ·在微生物检测上的应用 | 第19-22页 |
| 6 ATP硫酸化酶的研究 | 第22-25页 |
| ·ATP硫酸化酶的结构 | 第22页 |
| ·ATP硫酸化酶的功能研究 | 第22-23页 |
| ·ATP硫酸化酶的应用 | 第23-25页 |
| 参考文献 | 第25-30页 |
| 第二章 萤火虫荧光素酶在大肠杆菌中的表达、纯化及其应用 | 第30-64页 |
| 第一节 萤火虫荧光素酶在大肠杆菌中的表达、纯化及性质的研究 | 第30-55页 |
| 1 材料与方法 | 第30-41页 |
| ·菌株与质粒 | 第30-31页 |
| ·培养基与培养条件 | 第31页 |
| ·抗生素与浓度 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·引物 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-53页 |
| ·BL21(pBBR-luc)菌株的构建 | 第41-42页 |
| ·菌株Q1在不同生长阶段荧光素酶的表达情况 | 第42页 |
| ·耐温度或酸碱的突变株的筛选 | 第42页 |
| ·定点突变荧光素酶表达菌株的构建 | 第42页 |
| ·荧光素酶的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·诱导剂浓度及开始诱导菌浓度的优化 | 第43-44页 |
| ·荧光素酶的纯化 | 第44页 |
| ·蛋白质含量测定及活性测定 | 第44页 |
| ·荧光素酶酶学性质的初步研究 | 第44-53页 |
| 3 小结与讨论 | 第53-55页 |
| 第二节 萤火虫荧光素酶在微生物细胞ATP含量测定上的应用 | 第55-63页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·菌株与质粒 | 第55页 |
| ·培养基与培养条件 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| 2. 结果与分析 | 第57-61页 |
| ·BAC提取细菌ATP最佳作用浓度的确定 | 第57页 |
| ·BAC提取细菌ATP最佳作用时间的确定 | 第57-58页 |
| ·细菌的生物发光强度与平板计数的关系 | 第58-59页 |
| ·纳米材料Zn0对恶臭假单胞菌生物膜及细胞活性的影响 | 第59-61页 |
| 3 小结与讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-64页 |
| 第三章 酿酒酵母ATP硫酸化酶在大肠杆菌中的表达、纯化及其应用 | 第64-76页 |
| 1 材料与方法 | 第64-68页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第64页 |
| ·培养基与培养条件 | 第64-65页 |
| ·抗生素与浓度 | 第65页 |
| ·试剂 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-74页 |
| ·克隆载体的构建 | 第68-69页 |
| ·表达载体的构建 | 第69页 |
| ·重组ATPS的诱导表达 | 第69-70页 |
| ·重组ATPS的表达形式 | 第70页 |
| ·重组ATPS的开始诱导的菌液浓度的优化 | 第70-71页 |
| ·重组ATPS的纯化 | 第71页 |
| ·重组ATPS含量及活性检测 | 第71-72页 |
| ·APS及ATP硫酸化酶用量的选择 | 第72-73页 |
| ·PPi标准曲线及检测极限的确定 | 第73页 |
| ·PCR产物焦磷酸含量测定及DNA聚合酶活性比较 | 第73-74页 |
| 3 小结与讨论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-76页 |
| 全文总结 | 第76-78页 |
| 附录 文中所用的试剂配方 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
