| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| 第一节 咽侧体抑制激素的研究进展 | 第12-22页 |
| 1 神经肽类激素研究进展 | 第12-17页 |
| ·昆虫神经肽类激素 | 第13-15页 |
| ·咽侧体抑制激素 | 第13-14页 |
| ·蜕壳激素 | 第14页 |
| ·外激素合成激活神经肽 | 第14页 |
| ·FMRF amide相关神经肽 | 第14页 |
| ·促甾醇激素 | 第14-15页 |
| ·肌肉激活性神经肽 | 第15页 |
| ·甲壳动物神经肽类激素 | 第15-17页 |
| ·咽侧体抑制激素 | 第15-16页 |
| ·甲壳动物心激肽 | 第16页 |
| ·速激肽相关肽 | 第16-17页 |
| ·FaRPs肽 | 第17页 |
| ·促色素细胞素 | 第17页 |
| ·肠动肽 | 第17页 |
| 2 咽侧体抑制激素(AST)的结构 | 第17-20页 |
| ·昆虫AST的结构 | 第17-19页 |
| ·甲壳动物AST的结构 | 第19-20页 |
| 3 咽侧体抑制激素(AST)的功能 | 第20-21页 |
| ·昆虫AST的功能 | 第20页 |
| ·甲壳动物AST的功能 | 第20-21页 |
| 4 咽侧体抑制激素(AST)的应用 | 第21-22页 |
| 第二节 基因克隆、表达研究方法的概述 | 第22-32页 |
| 1 基因克隆研究方法的概述 | 第22-24页 |
| ·逆转录PCR | 第23页 |
| ·套式PCR | 第23页 |
| ·快速扩增cDNA末端技术 | 第23-24页 |
| 2 基因表达研究方法的概述 | 第24-32页 |
| ·复合PCR | 第24-25页 |
| ·免疫PCR | 第25页 |
| ·原位PCR | 第25页 |
| ·定量PCR | 第25-32页 |
| ·竞争PCR定量法 | 第25页 |
| ·非竞争性对照基因定量法 | 第25-26页 |
| ·极限稀释法 | 第26页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第26-32页 |
| ·实时荧光定量PCR的几个重要概念 | 第26-27页 |
| ·实时荧光定量PCR的分类 | 第27-30页 |
| ·实时荧光定量PCR技术的应用 | 第30-32页 |
| 第三节 本研究的目的与意义 | 第32-34页 |
| 第二章 青虾咽侧体抑制激素基因的克隆和序列分析 | 第34-64页 |
| 1 材料 | 第34页 |
| ·实验虾 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-46页 |
| ·青虾脑组织总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·RNA的浓度测定和质量检测 | 第36页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第36-37页 |
| ·PCR引物设计 | 第37-38页 |
| ·中间片段的扩增 | 第38-39页 |
| ·青虾AST基因的3'RACE | 第39-40页 |
| ·青虾AST基因的5'RACE | 第40-43页 |
| ·Total RNA的处理 | 第40-42页 |
| ·5' RACE | 第42-43页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第43-45页 |
| ·感受态的制备 | 第43-44页 |
| ·PCR产物的回收 | 第44页 |
| ·连接 | 第44页 |
| ·转化 | 第44-45页 |
| ·重组克隆的筛选 | 第45页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第45页 |
| ·序列的测定及分析 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-61页 |
| ·青虾脑组织总RNA抽提结果 | 第46页 |
| ·青虾AST基因中间片段的分离 | 第46-47页 |
| ·青虾AST基因3'端的分离 | 第47-48页 |
| ·青虾AST基因5'端的分离 | 第48-49页 |
| ·序列分析 | 第49-55页 |
| ·青虾AST cDNA的序列结构特征 | 第49-53页 |
| ·青虾AST蛋白二级结构与空间结构预测 | 第53-55页 |
| ·疏水性分析 | 第53-54页 |
| ·跨膜区分析 | 第54页 |
| ·信号肽预测 | 第54-55页 |
| ·青虾AST氨基酸序列比对 | 第55-58页 |
| ·青虾AST蛋白相似度、氨基酸种类分析 | 第58-60页 |
| ·系统进化分析 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 第三章 青虾咽侧体抑制激素基因在不同组织中的表达分析 | 第64-76页 |
| 1 材料 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-68页 |
| ·实验原理 | 第64页 |
| ·总RNA的提取 | 第64-65页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第65页 |
| ·PCR引物设计 | 第65-66页 |
| ·半定量PCR(RT-PCR) | 第66页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第66-68页 |
| ·目的基因荧光定量PCR反应 | 第66-68页 |
| ·内参基因荧光定量PCR反应 | 第68页 |
| ·结果判断 | 第68页 |
| 3 结果 | 第68-73页 |
| ·青虾各组织总RNA的提取 | 第68-69页 |
| ·荧光定量PCR引物检测 | 第69-70页 |
| ·青虾AST mRNA在不同组织中表达的RT-PCR分析 | 第70页 |
| ·青虾AST mRNA在不同组织中表达的qRT-PCR分析 | 第70-73页 |
| ·AST mRNA的组织表达差异 | 第70-72页 |
| ·β-actin mRNA的组织表达差异 | 第72-73页 |
| ·AST mRNA相对定量结果 | 第73页 |
| 4 讨论 | 第73-76页 |
| 全文结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 附录 实验试剂及配置 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 已发表或已接收的论文 | 第90页 |
