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牙鲆性别相关基因的克隆与表达分析

致谢第1-5页
摘要第5-7页
Abstract第7-12页
第一章 绪论第12-36页
   ·鱼类性别决定第12-15页
     ·遗传型性别决定第12-13页
     ·环境型性别决定第13-15页
     ·环境影响的遗传型性别决定第15页
   ·鱼类的性腺分化和发育第15-17页
     ·鱼类的性腺分化第15-16页
     ·鱼类的性腺发育第16-17页
   ·鱼类性别决定与性腺分化发育相关基因第17-33页
     ·重要性别相关基因第19-24页
       ·芳香化酶基因第19-20页
       ·dmrt 家族第20-21页
       ·sox 基因第21-22页
       ·amh 基因第22页
       ·foxl2 基因第22-23页
       ·ftz-f1第23页
       ·dax1 基因第23-24页
     ·wnt4 基因第24-27页
       ·wnt 基因及其家族第25页
       ·wnt 信号通路第25-26页
       ·wnt4 基因在性腺分化和性别决定中的作用第26-27页
       ·鱼类中 wnt4 基因的研究进展第27页
     ·ar 和 er 基因第27-30页
       ·ar 和 er 的简介第28页
       ·ar 和 er 在哺乳类等性腺分化和性别决定中的作用第28-29页
       ·ar 和 er 在鱼类中的研究进展第29-30页
     ·Lhx1 基因第30-31页
     ·rspo1 基因第31-33页
       ·rspo1 在性腺分化和性别决定中的作用第32页
       ·鱼类中 rspo1 研究进展第32-33页
   ·鲆鲽鱼类性别相关基因研究进展第33-34页
   ·立题依据及意义第34-36页
第二章 牙鲆 wnt4 基因克隆及表达分析第36-66页
   ·材料与方法第36-51页
     ·实验材料第36-37页
     ·主要实验仪器第37-38页
     ·主要试剂第38页
     ·引物第38-39页
     ·实验方法第39-51页
       ·牙鲆雌性各组织总 RNA 的提取及 cDNA 第一链的合成第39-43页
       ·RT-PCR 扩增基因 cDNA 保守片段第43-46页
       ·RACE 扩增基因第46-47页
       ·牙鲆 wnt4 基因 ORF 序列验证第47-48页
       ·RT-PCR第48页
       ·Real-time RT-PCR第48-49页
       ·性腺石蜡切片第49-50页
       ·数据分析第50-51页
   ·结果第51-62页
     ·牙鲆 wnt4 基因的序列及分析第51-53页
     ·牙鲆 WNT4 蛋白的结构和理化性质初步分析第53-55页
     ·牙鲆 WNT4 蛋白的同源性比较和分子系统进化分析第55-57页
     ·wnt4 在牙鲆雌雄成鱼不同组织的表达差异第57-59页
     ·wnt4 在牙鲆性腺不同发育时期的表达差异第59-60页
     ·wnt4 在牙鲆幼鱼性腺分化期的表达差异第60-62页
       ·雌核发育和高温性反转牙鲆的性别比例第60-61页
       ·wnt4 在牙鲆幼鱼性腺分化期的定量表达第61-62页
   ·讨论第62-66页
第三章 牙鲆 ar 和 er 基因克隆、启动子区克隆及表达分析第66-93页
   ·材料与方法第66-72页
     ·实验材料、主要实验仪器和试剂第66页
     ·引物第66-67页
     ·实验方法第67-72页
       ·牙鲆各组织总 RNA 的提取及 cDNA 第一链的合成第67-68页
       ·牙鲆性腺基因组 DNA 的提取第68页
       ·RACE 扩增 ar 基因第68页
       ·牙鲆 ar 基因 ORF 序列验证第68-69页
       ·genome walking 扩增 erα 启动子区序列第69-71页
       ·RT-PCR第71页
       ·real-time RT-PCR第71页
       ·数据分析第71-72页
   ·结果第72-90页
     ·牙鲆 ar 基因的序列及分析第72-81页
       ·牙鲆 ar 基因的 cDNA 序列及分析第72-75页
       ·牙鲆 ar 基因 cDNA 序列中 CpG 岛分析第75-76页
       ·牙鲆 AR 蛋白的结构和性质推导第76-78页
       ·牙鲆 AR 蛋白的同源性比较和分子系统进化分析第78-81页
     ·牙鲆 er 基因的序列分析第81-87页
       ·牙鲆 er cDNA 转录因子结合位点分析第81-86页
       ·牙鲆 erα 基因上游启动子区序列及转录因子结合位点 CpG 岛预测第86-87页
     ·ar& er 在牙鲆雌雄成鱼不同组织的表达差异第87-90页
   ·讨论第90-93页
第四章 牙鲆 Lhx1 克隆及表达分析第93-111页
   ·材料和方法第93-96页
     ·实验材料、主要实验仪器和试剂第93页
     ·引物第93-94页
     ·实验方法第94-96页
       ·牙鲆各组织总 RNA 的提取及 cDNA 第一链的合成第94页
       ·牙鲆 Lhx1a 基因全长 cDNA 序列的扩增第94-95页
       ·牙鲆 Lhx1a&Lhx1b 基因 ORF 序列验证第95页
       ·RT-PCR第95-96页
       ·性腺石蜡切片第96页
       ·数据分析第96页
   ·结果第96-108页
     ·牙鲆 Lhx1a 基因的序列及分析第96-100页
       ·牙鲆 Lhx1a 全长 cDNA 的获得第96-98页
       ·牙鲆 LHX1a 蛋白的结构和性质推导第98-100页
     ·牙鲆 Lhx1b 基因的序列和分析第100-104页
       ·牙鲆 Lhx1b 全长 cDNA第100-101页
       ·牙鲆 LHX1b 蛋白的结构和性质预测第101-104页
     ·牙鲆 LHX1 蛋白的同源性比较和分子系统进化分析第104-106页
     ·Lhx1a 和 Lhx1b 在牙鲆雌雄成鱼各组织的表达差异第106-107页
     ·Lhx1a 和 Lhx1b 在牙鲆性腺发育各期的差异表达谱第107-108页
   ·讨论第108-111页
第五章 牙鲆 rspo1 克隆及表达分析第111-120页
   ·材料与方法第111-113页
     ·实验材料、主要实验仪器和试剂第111页
     ·引物第111-112页
     ·实验方法第112-113页
       ·牙鲆性腺总 RNA 的提取及 cDNA 第一链的合成第112页
       ·牙鲆 rspo1 基因全长 cDNA 的获得第112页
       ·牙鲆 rspo1 基因 ORF 序列验证第112-113页
       ·RT-PCR 检测 rspo1 在牙鲆雌雄成鱼不同组织的差异表达第113页
       ·数据分析第113页
   ·结果第113-119页
     ·牙鲆 rspo1 基因的序列及分析第113-114页
     ·牙鲆 RSPO1 蛋白的结构和性质推导第114-117页
     ·牙鲆 RSPO1 蛋白的同源性比较和分子系统进化分析第117-118页
     ·rspo1 在牙鲆雌雄成鱼各组织的差异表达第118-119页
   ·讨论第119-120页
小结第120-121页
附录第121-124页
参考文献第124-135页
作者简历第135-136页
攻读硕士学位期间发表和完成的学术论文第136页

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