| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| ·生防细菌苏云金芽胞杆菌概述 | 第13-14页 |
| ·杀虫晶体蛋白 | 第14-15页 |
| ·营养期杀虫蛋白 | 第15-17页 |
| ·Vip1 和 Vip2 | 第16页 |
| ·Vip3 | 第16-17页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫机制 | 第17-20页 |
| ·Cry 蛋白杀虫机制 | 第17-18页 |
| ·Vip 蛋白杀虫机制 | 第18-19页 |
| ·Cry 蛋白与 Vip 蛋白杀虫机制差异 | 第19-20页 |
| ·苏云金芽胞杆菌蛋白的表达调控 | 第20-22页 |
| ·融合蛋白 | 第22-25页 |
| ·融合蛋白技术 | 第22-24页 |
| ·苏云金芽胞杆菌融合蛋白 | 第24-25页 |
| ·苏云金芽胞杆菌毒素间的协同增效作用 | 第25-26页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的应用及展望 | 第26-28页 |
| ·本研究的立题依据及目的意义 | 第28-30页 |
| 第二章 vip3Aa-gfp 融合基因及 cry1Ac N-terminal 的构建与表达 | 第30-53页 |
| ·实验材料 | 第30-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第30-31页 |
| ·酶及生化试剂 | 第31页 |
| ·培养基以及抗生素 | 第31页 |
| ·DNA Marker 和蛋白质 Marker | 第31-32页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32-33页 |
| ·供试昆虫 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-41页 |
| ·核苷酸与氨基酸序列的分析 | 第33-35页 |
| ·PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·双酶切反应 | 第36页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
| ·DNA 切胶回收 | 第36页 |
| ·PCR 纯化回收 | 第36页 |
| ·DNA 片段的连接 | 第36页 |
| ·大肠杆菌热激感受态细胞制备 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌热击转化 | 第37页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第37页 |
| ·苏云金芽胞杆菌电击感受态细胞制备 | 第37-38页 |
| ·苏云金芽胞杆菌电击转化 | 第38页 |
| ·苏云金芽胞杆菌热裂解法粗提 DNA | 第38页 |
| ·基因序列的测定及分析 | 第38页 |
| ·Bt 菌体表达蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第38-39页 |
| ·蛋白溶解性检测 | 第39-40页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 Bt 菌株 | 第40页 |
| ·多功能酶标仪检测荧光强度 | 第40页 |
| ·多功能酶标仪使用方法 | 第40页 |
| ·小菜蛾生物活性测定 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-50页 |
| ·vip3Aa 与 gfp 基因融合表达载体以及对照载体的构建 | 第41-44页 |
| ·融合蛋白荧光分析 | 第44-45页 |
| ·工程菌株荧光亮度的检测 | 第45-46页 |
| ·表达载体 p8E21b-1AcN 的构建 | 第46-47页 |
| ·Cry1Ac 蛋白的 N 端活性区域的生测 | 第47-49页 |
| ·Cry1Ac 蛋白的 N 端溶解性 | 第49-50页 |
| ·分析与讨论 | 第50-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第三章 vip3Aa 与 cry1Ac 融合基因的构建与表达 | 第53-75页 |
| ·实验材料 | 第53-55页 |
| ·菌株与质粒 | 第53-54页 |
| ·Western Blot 杂交溶液与试剂 | 第54页 |
| ·其它 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·引物及序列 | 第55页 |
| ·蛋白质印迹杂交(Western Blot) | 第55-56页 |
| ·显微镜观察晶体形态 | 第56页 |
| ·Bt 生长曲线的测定 | 第56-57页 |
| ·Bt 蛋白 LB 培养基中表达时间的测定 | 第57页 |
| ·甜菜夜蛾生物活性测定 | 第57页 |
| ·其它 | 第57页 |
| ·结果 | 第57-72页 |
| ·vip3Aa 与 cry1Ac 基因融合表达载体的构建 | 第57-61页 |
| ·HD73 及融合蛋白表达菌株生长情况比较 | 第61页 |
| ·融合基因工程菌的显微观察 | 第61-62页 |
| ·发酵培养基的筛选 | 第62-63页 |
| ·cry8E 启动子下 Cry1Ac 蛋白表达时间的测定 | 第63-64页 |
| ·SDS-PAGE 和 Western Blot 分析融合蛋白 | 第64-65页 |
| ·融合蛋白对小菜蛾生物活性的测定 | 第65-68页 |
| ·融合蛋白对甜菜夜蛾生物活性测定 | 第68-72页 |
| ·分析与讨论 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第73-75页 |
| 第四章 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 作者简介 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
