| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 目录 | 第4-6页 |
| 符号说明 | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-18页 |
| 1 杆状病毒简介 | 第7-13页 |
| ·杆状病毒的分类及形态结构 | 第7-9页 |
| ·杆状病毒的感染与复制 | 第9-10页 |
| ·杆状病毒蛋白质组 | 第10-13页 |
| ·杆状病毒的应用 | 第13页 |
| 2 P6.9 蛋白 | 第13-14页 |
| 3 亲和层析技术 | 第14-16页 |
| ·亲和层析原理 | 第14页 |
| ·亲和载体的基本要求和选择 | 第14-15页 |
| ·亲和层析的优缺点 | 第15页 |
| ·常用的分离纯化标签 | 第15-16页 |
| 4 酵母双杂交系统 | 第16-18页 |
| ·酵母双杂交的原理 | 第16页 |
| ·酵母双杂交系统的优缺点 | 第16-18页 |
| 第二章 AcMNPV p6.9基因的克隆表达纯化 | 第18-30页 |
| 1 材料 | 第18-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第18页 |
| ·工具酶及相关试剂 | 第18页 |
| ·试剂盒 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·电泳缓冲液 | 第19-20页 |
| ·引物 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-25页 |
| ·质粒提取 | 第21页 |
| ·PCR反应体系和程序 | 第21-22页 |
| ·胶回收试剂盒回收DNA片段 | 第22-23页 |
| ·氯化钙法制备感受态细胞及转化 | 第23页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·融合蛋白的诱导表达可溶性分析及纯化 | 第24-25页 |
| ·SDS-PAGE | 第25页 |
| ·抗体制备 | 第25页 |
| ·pull down实验 | 第25页 |
| ·western bloting分析 | 第25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-29页 |
| ·p6.9基因的克隆和表达载体的构建 | 第26页 |
| ·P6.9蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第26-27页 |
| ·表达产物的纯化 | 第27-28页 |
| ·pulldown实验及western blot检测 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 从AcMNPV感染后的SF9细胞cDNA文库中筛选与P6.9相互作用的蛋白质 | 第30-41页 |
| 1. 材料 | 第30-31页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·质粒 | 第30页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·引物 | 第31页 |
| 2. 方法 | 第31-36页 |
| ·病毒及SF9细胞总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·合成双链cDNA | 第32-33页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·cDNA文库的建立及检测 | 第33-34页 |
| ·cDNA文库质量鉴定 | 第34页 |
| ·载体的构建 | 第34页 |
| ·诱饵载体的自激活鉴定和毒性分析 | 第34-35页 |
| ·利用酵母结合法筛选AcMNPV SF9酵母双杂交cDNA文库 | 第35页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第35页 |
| ·阳性克隆酵母质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆中文库质粒插入片段的克隆 | 第36页 |
| ·插入片段的测序及分析 | 第36页 |
| ·检测P6.9蛋白与PK-1蛋白的相互作用 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-40页 |
| ·AcMNPV SF9 cDNA文库的构建 | 第36-38页 |
| ·p6.9诱饵载体和pk-1文库载体的构建 | 第38-39页 |
| ·诱饵蛋白毒性与自激活检测 | 第39页 |
| ·筛选与P6.9互作的阳性克隆 | 第39-40页 |
| ·P6.9与PK1蛋白相互作用检测 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 致谢 | 第47-49页 |
| 攻读硕士学位期间学术论文发表情况 | 第49页 |
