| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略语中英文对照 | 第15-16页 |
| 引言 | 第16-19页 |
| 参考文献 | 第17-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-51页 |
| 第一章 牦牛和普通牛种间杂交雄性不育的研究进展 | 第19-24页 |
| 1 犏牛精子发生水平的研究 | 第19-20页 |
| 2 生殖器官组织及内分泌的研究 | 第20-21页 |
| 3 细胞遗传学的研究 | 第21页 |
| 4 精子发生相关基因的研究 | 第21-22页 |
| 5 促进育性恢复的尝试 | 第22页 |
| 参考文献 | 第22-24页 |
| 第二章 精子发生过程中的相关基因 | 第24-33页 |
| 1 生精细胞周期蛋白基因 | 第25-26页 |
| 2 cAMP反应元件调节子 | 第26-27页 |
| 3 热休克蛋HSP70 | 第27页 |
| 4 DAZ家族 | 第27-28页 |
| 5 其他相关基因 | 第28-29页 |
| ·原癌基因 | 第28-29页 |
| ·细胞凋亡相关基因 | 第29页 |
| 6 问题与展望 | 第29页 |
| 参考文献 | 第29-33页 |
| 第三章 精子发生与表观遗传的建立 | 第33-39页 |
| 1 精子发生过程中DNA甲基化的建立 | 第33-34页 |
| ·Dnmts(DNA胞嘧啶甲基化转移酶)活性 | 第33页 |
| ·雄性特异印记的调节机制 | 第33-34页 |
| 2 精子发生过程中睾丸特异的组蛋白变异体 | 第34-35页 |
| ·连接组蛋白变异体 | 第34页 |
| ·H3变异体 | 第34-35页 |
| ·H2B变异体 | 第35页 |
| ·H2A变异体 | 第35页 |
| 3 精子发生过程中组蛋白的修饰 | 第35-36页 |
| ·组蛋白乙酰化 | 第35-36页 |
| ·组蛋白的甲基化 | 第36页 |
| ·组蛋白的磷酸化 | 第36页 |
| ·组蛋白的泛素化 | 第36页 |
| 4 雄性生殖细胞特异的染色质结构 | 第36-37页 |
| ·过渡蛋白 | 第36-37页 |
| ·鱼精蛋白 | 第37页 |
| 5 展望 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-39页 |
| 第四章 DNA甲基化及其检测方法研究进展 | 第39-51页 |
| 1 甲基化与CpG岛 | 第39-40页 |
| 2 DNA甲基化的功能与作用 | 第40-44页 |
| ·DNA甲基化与基因表达 | 第40页 |
| ·DNA甲基化与基因印记 | 第40-42页 |
| ·DNA甲基化与X染色体失活 | 第42页 |
| ·DNA甲基化与生长发育 | 第42页 |
| ·DNA甲基化与机体免疫力 | 第42-43页 |
| ·DNA甲基化与肿瘤 | 第43-44页 |
| 3 DNA甲基化的研究方法 | 第44-47页 |
| ·全基因组DNA甲基化检测方法 | 第44-45页 |
| ·Sss Ⅰ甲基甲基酶温育法 | 第44页 |
| ·氯乙醛反应法 | 第44页 |
| ·免疫学法 | 第44-45页 |
| ·高效液相色谱(HPIE)法 | 第45页 |
| ·位点特异性DNA甲基化的检测方法 | 第45-47页 |
| ·甲基化敏感限制酶方法 | 第45页 |
| ·亚硫酸盐测序法 | 第45-46页 |
| ·甲基化特异性PCR法(MSP) | 第46页 |
| ·结合亚硫酸氢盐限制性分析法(COBRA) | 第46页 |
| ·荧光标记法(MethyLight) | 第46-47页 |
| 4 问题与展望 | 第47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 第二部分 试验研究 | 第51-111页 |
| 第五章 牦牛H19/IGF2印记控制区(ICR)的分子克隆及序列分析 | 第51-65页 |
| 1 材料与方法 | 第51-58页 |
| ·实验动物 | 第51-52页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第52页 |
| ·血液基因组DNA的提取 | 第52-53页 |
| ·引物设计 | 第53-54页 |
| ·H19差异甲基化区域的扩增 | 第54页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第54-55页 |
| ·目的片段回收 | 第55页 |
| ·将目的片段连接到pMD19-T Vector上(TA克隆) | 第55-58页 |
| ·PCR产物与pMD19-T Vector连接反应 | 第55-56页 |
| ·DH5a感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第56页 |
| ·转化 | 第56-57页 |
| ·质粒DNA的提取(碱裂解法) | 第57-58页 |
| ·序列的拼接与生物信息学分析 | 第58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-61页 |
| ·克隆与测序 | 第58-59页 |
| ·同源性分析 | 第59页 |
| ·序列特征分析 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 第六章 犏牛及其亲本睾丸组织中H19基因mRNA表达水平、DNA甲基化状态差异分析 | 第65-80页 |
| 1 材料和方法 | 第65-71页 |
| ·实验动物 | 第65-66页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第66页 |
| ·RNA提取与纯化 | 第66-67页 |
| ·反转录 | 第67页 |
| ·组织DNA提取 | 第67-68页 |
| ·引物设计 | 第68页 |
| ·H19 RT-PCR | 第68-69页 |
| ·H19 Real-time PCR定量分析 | 第69页 |
| ·基因组DNA的亚硫酸氢钠修饰 | 第69-70页 |
| ·BSP扩增反应 | 第70页 |
| ·序列的确认与统计分析 | 第70-71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-75页 |
| ·犏牛及其亲本H19基因的表达分析 | 第71-72页 |
| ·亚硫酸氢钠处理的H19巢式PCR的扩增 | 第72-73页 |
| ·犏牛及其亲本H19 ICR的甲基化状态 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 第七章 犏牛及其亲本睾丸组织中IGF2基因mRNA表达水平、DNA甲基化状态差异分析 | 第80-91页 |
| 1 材料和方法 | 第80-83页 |
| ·实验动物 | 第80页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第80-81页 |
| ·引物设计 | 第81-82页 |
| ·牦牛IGF2基因第十外显子部分序列的克隆和测序 | 第82页 |
| ·IGF2 RT-PCR及Real-time PCR定量分析 | 第82-83页 |
| ·IGF2基因第十外显子DMR区甲基化分析 | 第83页 |
| ·DNA的亚硫酸氢钠修饰 | 第83页 |
| ·BSP扩增反应 | 第83页 |
| ·序列的确认与统计分析 | 第83页 |
| 2 结果 | 第83-86页 |
| ·牦牛IGF2基因第十外显子部分序列的扩增 | 第83-84页 |
| ·犏牛及其亲本睾丸组织中IGF2基因mRNA表达水平 | 第84-85页 |
| ·犏牛及其亲本IGF2 DMR甲基化状态 | 第85-86页 |
| 3 讨论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-91页 |
| 第八章 犏牛及其亲本睾丸组织中印记基因SNRPN的表达及DMR甲基化分析 | 第91-102页 |
| 1 材料和方法 | 第91-94页 |
| ·实验动物 | 第91-92页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第92页 |
| ·引物设计 | 第92页 |
| ·牦牛SNRPN基因5′端序列的克隆和测序 | 第92-93页 |
| ·SNRPNRT-PCR及Real-time PCR定量分析 | 第93页 |
| ·SNRPN基因DMR区甲基化分析 | 第93页 |
| ·DNA的亚硫酸氢钠修饰 | 第93页 |
| ·BSP扩增反应 | 第93页 |
| ·序列的确认与统计分析 | 第93-94页 |
| 2 结果 | 第94-98页 |
| ·SNRPN基因5′端序列特征 | 第94-95页 |
| ·犏牛及其亲本睾丸组织中SNRPN基因mRNA表达水平 | 第95-97页 |
| ·犏牛及其亲本SNRPNDMR甲基化状态 | 第97-98页 |
| 3 讨论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-102页 |
| 第九章 DAZL基因5′端CpG岛DNA甲基化水平及其与犏牛雄性不育的关系研究 | 第102-111页 |
| 1 材料和方法 | 第102-104页 |
| ·实验动物 | 第102页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第102页 |
| ·引物设计 | 第102-103页 |
| ·牦牛DAZL基因5′端序列的克隆和测序 | 第103页 |
| ·DAZL基因5′端甲基化分析 | 第103-104页 |
| ·DNA的亚硫酸氢钠修饰 | 第103-104页 |
| ·BSP扩增反应 | 第104页 |
| 2 结果 | 第104-107页 |
| ·牦牛DAZL基因5′端序列特征 | 第104-105页 |
| ·犏牛及其亲本DAZL启动子区甲基化状态 | 第105-107页 |
| 3. 讨论 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-111页 |
| 全文结论 | 第111-113页 |
| 全文创新 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第117页 |
