| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-30页 |
| ·海水养殖病原菌溶藻弧菌 | 第13-14页 |
| ·溶藻弧菌的毒力因子和致病机理 | 第14-23页 |
| ·胞外蛋白酶 | 第14页 |
| ·Ⅵ型分泌系统 | 第14-23页 |
| ·Ⅵ型分泌系统的结构 | 第17-19页 |
| ·Ⅵ型分泌系统的表达调控 | 第19-21页 |
| ·Ⅵ型分泌系统的交互通讯 | 第21-23页 |
| ·群体感应系统 | 第23-24页 |
| ·人类致病菌溶藻弧菌 | 第24-26页 |
| ·铜绿假单胞菌中Fur介导的全局调控 | 第26-27页 |
| ·本研究主要内容及意义 | 第27-30页 |
| 第2章 群体感应系统和RpoN调控溶藻弧菌Ⅵ型分泌系统 | 第30-51页 |
| ·前言 | 第30-31页 |
| ·实验材料 | 第31-34页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第31页 |
| ·引物 | 第31-34页 |
| ·主要分析生物学试剂盒仪器设备 | 第34页 |
| ·蛋白和DNA分析软件 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第34页 |
| ·感受态细胞制备 | 第34页 |
| ·感受态细胞转化 | 第34页 |
| ·框内无标记缺失突变株的构建 | 第34-36页 |
| ·插入失活突变株的构建 | 第36页 |
| ·回补菌株的构建 | 第36-37页 |
| ·生长曲线测定 | 第37页 |
| ·Western blotting蛋白印迹 | 第37-38页 |
| ·全菌蛋白样品制备 | 第37页 |
| ·上清中蛋白样品制备 | 第37页 |
| ·蛋白印迹 | 第37-38页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第38页 |
| ·运动性分析 | 第38页 |
| ·胞外蛋白酶活性分析 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-47页 |
| ·溶藻弧菌Ⅵ型分泌系统基因簇鉴定 | 第39-40页 |
| ·突变株的构建 | 第40-41页 |
| ·hcp基因及其编码蛋白的信息学分析 | 第41页 |
| ·Hcp1蛋白的生长依赖型表达 | 第41-42页 |
| ·群体感应系统调控Hcp1的表达 | 第42-43页 |
| ·RpoN((δ~(54))和VasH调控Hcp1的表达 | 第43-45页 |
| ·LuxR、RpoN和VasH调控其他T6SS基因 | 第45-46页 |
| ·VasH调控运动性及胞外蛋白酶的活性 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 第3章 Ⅵ型分泌系统调控病原相关表型 | 第51-64页 |
| ·前言 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51-54页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第51-52页 |
| ·引物 | 第52-54页 |
| ·主要分子生物学试剂盒仪器设备 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·扫描电镜样品制备 | 第55页 |
| ·生物被膜形成分析 | 第55页 |
| ·生物聚集 | 第55页 |
| ·胞外蛋白酶活性分析 | 第55-56页 |
| ·鱼体攻毒实验 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-63页 |
| ·T6SS突变株的扫描电镜 | 第56-57页 |
| ·T6SS影响溶藻弧菌的运动性 | 第57页 |
| ·T6SS影响溶藻弧菌生物被膜形成及聚集 | 第57页 |
| ·T6SS影响溶藻弧菌胞外蛋白酶的形成 | 第57-59页 |
| ·T6SSVA1单个基因影响运动性、生物被膜和胞外蛋白酶 | 第59-63页 |
| ·T6SSVA1单个基因突变株构建 | 第59-61页 |
| ·T6SSVA1单个基因影响多表型 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第4章 PppA/PpkA1调控T6SS、QS和c-di-GMP合成 | 第64-84页 |
| ·前言 | 第64页 |
| ·实验材料 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-67页 |
| ·c-di-GMP定量分析 | 第66-67页 |
| ·生物芯片分析 | 第67页 |
| ·实验结果 | 第67-81页 |
| ·PppA/PpkA1调控Hcp1的表达和分泌 | 第67-69页 |
| ·△pppA、△ppkA1和pppA~+突变株的构建 | 第67-68页 |
| ·PppA/PpkA1调控Hcp1的表达和分泌 | 第68-69页 |
| ·PppA/PpkA1调控Asp的表达 | 第69-71页 |
| ·PppA/PpkA1通过LuxR调控Asp的表达 | 第71-72页 |
| ·PppA/Ppk1A调控多表型 | 第72-73页 |
| ·PppA/PpkA1通过c-di-GMP调控多表型 | 第73-75页 |
| ·PppA和PpkA1缺失株全基因组转录谱分析 | 第75-81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| ·本章小结 | 第83-84页 |
| 第5章 腺苷通过激活Fur来调控铜绿假单胞菌的病原性 | 第84-110页 |
| ·前言 | 第84-85页 |
| ·实验材料 | 第85-87页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第85-86页 |
| ·引物 | 第86页 |
| ·主要分子生物学试剂和仪器设备 | 第86-87页 |
| ·分析软件 | 第87页 |
| ·实验方法 | 第87-91页 |
| ·生物被膜分析 | 第87页 |
| ·总RNA提取和芯片分析 | 第87页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第87页 |
| ·爬动性和鼠李糖脂分析 | 第87-88页 |
| ·毒力因子分析 | 第88页 |
| ·秀丽隐杆线虫慢性杀伤分析 | 第88页 |
| ·Fur蛋白的表达和纯化 | 第88-89页 |
| ·电泳迁移分析 | 第89-90页 |
| ·对接分析 | 第90-91页 |
| ·实验结果 | 第91-107页 |
| ·腺苷减少铜绿假单胞菌中生物被膜的形成 | 第91-93页 |
| ·腺苷通过减少鼠李糖脂生成来减弱运动性 | 第93-96页 |
| ·腺苷降低多种毒力因子的产生 | 第96页 |
| ·腺苷降低铜绿假单胞菌对线虫的致病性 | 第96页 |
| ·腺苷抑制摄铁相关的调节子 | 第96-104页 |
| ·腺苷影响Fur蛋白结合铁摄取基因 | 第104页 |
| ·腺苷与Fur蛋白结合位点预测 | 第104-107页 |
| ·讨论 | 第107-108页 |
| ·本章小结 | 第108-110页 |
| 第6章 结论和创新点 | 第110-113页 |
| ·主要结论 | 第110-111页 |
| ·论文创新点 | 第111-112页 |
| ·展望 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-126页 |
| 攻读博士学位期间研究成果 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
