| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-20页 |
| 第1章 绪论 | 第20-40页 |
| ·课题背景及研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| ·乳腺癌的病因学和发病机制 | 第21-28页 |
| ·病因学 | 第21-23页 |
| ·发病机制 | 第23-28页 |
| ·乳腺癌生物治疗的研究进展 | 第28-37页 |
| ·乳腺癌基因治疗的策略和方向 | 第28-31页 |
| ·基因治疗存在的问题和展望 | 第31-32页 |
| ·乳铁蛋白的研究现状 | 第32-35页 |
| ·重组人乳铁蛋白的转基因研究 | 第35-36页 |
| ·重组人乳铁蛋白的抗肿瘤作用及其机制的研究进展 | 第36-37页 |
| ·本文的主要研究内容 | 第37-40页 |
| 第2章 重组人乳铁蛋白抗小鼠乳腺癌作用的研究 | 第40-64页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·试验材料 | 第41-42页 |
| ·药品和试剂 | 第41页 |
| ·主要试验仪器 | 第41-42页 |
| ·试验动物和细胞株 | 第42页 |
| ·试验方法 | 第42-46页 |
| ·Ad-rhLTF 在 HEK293 细胞中的扩增 | 第42页 |
| ·小鼠 EMT6 乳腺癌模型的建立 | 第42-43页 |
| ·有效剂量和最大耐受量的确定 | 第43页 |
| ·确定小鼠治疗剂量 | 第43页 |
| ·试验动物分组及药物处理 | 第43-44页 |
| ·小鼠一般状态观察 | 第44页 |
| ·肿瘤生长抑制率测定 | 第44页 |
| ·人乳铁蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达 | 第44-45页 |
| ·小鼠肝脏、肾脏病理学分析 | 第45页 |
| ·小鼠血常规、肝功能和肾功能的检测 | 第45-46页 |
| ·小鼠肿瘤组织细胞形态学的观察 | 第46页 |
| ·小鼠肿瘤组织中 p53、CerbB-2 和 Ki-67 的表达 | 第46页 |
| ·统计学数据处理 | 第46页 |
| ·试验结果 | 第46-56页 |
| ·Ad-rhLTF 在 HEK293 细胞中的扩增 | 第46-47页 |
| ·小鼠 EMT6 乳腺癌模型的建立 | 第47-48页 |
| ·Ad-rhLTF 的有效剂量和最大耐受量 | 第48页 |
| ·小鼠一般情况的观察 | 第48页 |
| ·Ad-rhLTF 对小鼠 EMT6 乳腺癌移植瘤生长的抑制作用 | 第48-49页 |
| ·人 LTF 在小鼠肿瘤组织中的表达 | 第49-51页 |
| ·肝脏、肾脏病理形态学检测结果 | 第51-52页 |
| ·血常规和肝、肾功能的变化 | 第52页 |
| ·肿瘤组织的病理学观察 | 第52-53页 |
| ·肿瘤组织中突变型 p53、CerbB-2 和 Ki-67 的表达 | 第53-56页 |
| ·讨论 | 第56-62页 |
| ·应用腺病毒载体的评价 | 第56-58页 |
| ·建立小鼠乳腺癌模型 | 第58-59页 |
| ·Ad-rhLTF 成功转染 EMT6 小鼠乳腺癌细胞 | 第59-60页 |
| ·Ad-rhLTF 抑制 EMT6 小鼠乳腺癌细胞生长的作用 | 第60页 |
| ·Ad-rhLTF 抑制突变型 p53、CerbB-2 和 Ki-67 的表达 | 第60-62页 |
| ·Ad-rhLTF 对 EMT6 荷瘤小鼠的毒副作用 | 第62页 |
| ·本章小结 | 第62-64页 |
| 第3章 Ad-rhLTF 诱导 EMT6 小鼠乳腺癌细胞凋亡作用及其机制 | 第64-88页 |
| ·引言 | 第64-65页 |
| ·试验材料 | 第65-66页 |
| ·药品和试剂 | 第65-66页 |
| ·主要试验仪器 | 第66页 |
| ·试验动物和细胞株 | 第66页 |
| ·试验方法 | 第66-70页 |
| ·Ad-rhLTF 在 HEK293 细胞中的扩增 | 第66页 |
| ·小鼠乳腺癌模型的建立和药物处理 | 第66-67页 |
| ·人乳铁蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达 | 第67页 |
| ·肿瘤生长抑制率的测定 | 第67页 |
| ·光学显微镜下观察肿瘤细胞凋亡形态学的变化 | 第67页 |
| ·EMT6 小鼠肿瘤细胞凋亡的 TUNEL 染色 | 第67页 |
| ·流式细胞技术检测肿瘤细胞周期和细胞凋亡 | 第67-68页 |
| ·免疫组化法检测小鼠肿瘤组织 Bcl-2、Bax、PKB 和 PKC 的表达 | 第68页 |
| ·肿瘤组织中总 RNA 提取及反转录 PCR | 第68页 |
| ·肿瘤组织 p53、Bcl-2、Bax、Fas、FasL 和 caspase 3 mRNA 的表达 | 第68-70页 |
| ·肿瘤组织 Bcl-2、Bax、Fas、FasL 和 caspase 3 的蛋白表达检测 | 第70页 |
| ·统计学数据处理 | 第70页 |
| ·试验结果 | 第70-82页 |
| ·Ad-rhLTF 在 293 细胞中的扩增 | 第70页 |
| ·人 LTF 在小鼠肿瘤组织中的表达 | 第70-71页 |
| ·Ad-rhLTF 对小鼠体重和肿瘤生长的影响 | 第71页 |
| ·Ad-rhLTF 对小鼠肿瘤细胞凋亡形态学的影响 | 第71-72页 |
| ·TUNEL 染色检测小鼠肿瘤组织凋亡百分率 | 第72-74页 |
| ·Ad-rhLTF 对小鼠肿瘤组织细胞周期的影响 | 第74-75页 |
| ·免疫组化法检测肿瘤组织中 Bcl-2、Bax、PKB 和 PKC 表达 | 第75-78页 |
| ·小鼠肿瘤组织的总 RNA 提取和鉴定 | 第78-79页 |
| ·小鼠肿瘤组织 p53、Bcl-2、Bax、Fas、FasL、caspase 3 的表达 | 第79-82页 |
| ·讨论 | 第82-87页 |
| ·Ad-rhLTF 诱导小鼠 EMT6 肿瘤细胞凋亡形态学改变 | 第83页 |
| ·Ad-rhLTF 对 EMT6 荷瘤小鼠肿瘤细胞周期的影响 | 第83页 |
| ·Ad-rhLTF 诱导肿瘤细胞凋亡分子机制 | 第83-87页 |
| ·本章小结 | 第87-88页 |
| 第4章 Ad-rhLTF 对 EMT6 小鼠免疫功能的影响 | 第88-114页 |
| ·引言 | 第88-89页 |
| ·试验材料 | 第89页 |
| ·药品和试剂 | 第89页 |
| ·主要试验仪器 | 第89页 |
| ·试验动物和细胞株 | 第89页 |
| ·试验方法 | 第89-95页 |
| ·EMT6 乳腺癌小鼠模型的建立 | 第89页 |
| ·试验分组 | 第89-90页 |
| ·荷瘤小鼠体重和肿瘤生长抑制率的测定 | 第90页 |
| ·Ad-rhLTF 对荷瘤小鼠免疫器官的影响 | 第90页 |
| ·小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定 | 第90-91页 |
| ·小鼠 NK 细胞活性测定 | 第91页 |
| ·ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力的测定 | 第91页 |
| ·小鼠外周血 T 淋巴细胞亚群的检测 | 第91-92页 |
| ·脾细胞上清液中 IL-2 的检测 | 第92页 |
| ·腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α的检测 | 第92页 |
| ·小鼠血清中 IL-2、TNF-α的含量测定 | 第92页 |
| ·PBMC 中 IL-2、TNF-α和 B7 分子 mRNA 的检测 | 第92-95页 |
| ·Western blot 检测小鼠脾细胞中 NF-κB、AP-1 的表达 | 第95页 |
| ·统计学处理 | 第95页 |
| ·试验结果 | 第95-107页 |
| ·Ad-rhLTF 对乳腺癌荷瘤小鼠体重和肿瘤抑制率的影响 | 第95-96页 |
| ·Ad-rhLTF 对小鼠免疫器官的影响 | 第96-98页 |
| ·Ad-rhLTF 对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 | 第98-100页 |
| ·小鼠 NK 细胞活性的变化 | 第100-101页 |
| ·小鼠脾脏淋巴细胞增殖的情况 | 第101页 |
| ·Ad-rhLTF 对小鼠外周血 T 淋巴细胞亚群的影响 | 第101-102页 |
| ·Ad-rhLTF 对脾细胞分泌 IL-2 和腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α的影响 | 第102-103页 |
| ·血清中 IL-2 和 TNF-α的变化 | 第103页 |
| ·小鼠 PBMC 中 IL-2、TNF-α和 B7 分子 mRNA 的表达 | 第103-105页 |
| ·小鼠脾细胞 NF-κB、AP-1 的表达 | 第105-107页 |
| ·讨论 | 第107-112页 |
| ·Ad-rhLTF 对小鼠胸腺指数、脾指数的影响 | 第107-108页 |
| ·Ad-rhLTF 对 EMT6 乳腺癌小鼠非特异性免疫功能的影响 | 第108-109页 |
| ·Ad-rhLTF 对荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响 | 第109-110页 |
| ·Ad-rhLTF 对细胞因子 IL-2 和 TNF-α的影响 | 第110-111页 |
| ·Ad-rhLTF 对 PBMC 协同刺激分子 B7 表达的影响 | 第111页 |
| ·小鼠脾细胞中 NF-κB 和 AP-1 的表达 | 第111-112页 |
| ·本章小结 | 第112-114页 |
| 第5章 Ad-rhLTF 诱导人 MCF-7 乳腺癌细胞凋亡的研究 | 第114-138页 |
| ·引言 | 第114页 |
| ·试验材料 | 第114-116页 |
| ·细胞株 | 第114页 |
| ·试剂 | 第114-115页 |
| ·主要仪器 | 第115页 |
| ·试剂配制 | 第115-116页 |
| ·试验方法 | 第116-122页 |
| ·细胞培养和收集 | 第116页 |
| ·MTT 法检测 MCF-7 细胞增殖活性 | 第116页 |
| ·Ad-rhLTF 的转染程序 | 第116-117页 |
| ·Ad-rhLTF 转染 MCF-7 细胞后 hLTF 的表达 | 第117页 |
| ·苏木精-伊红染色试验 | 第117页 |
| ·Hoechst 33342 荧光单染试验 | 第117-118页 |
| ·AO/EB 荧光双染试验 | 第118页 |
| ·电镜观察 MCF-7 细胞的凋亡 | 第118页 |
| ·流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位 | 第118页 |
| ·Annexin V- FITC 染色检测 MCF-7 细胞凋亡 | 第118-119页 |
| ·凝胶电泳法 MCF-7 细胞 DNA ladder 分析 | 第119页 |
| ·MCF-7 细胞的 TUNEL 染色 | 第119-120页 |
| ·Ad-rhLTF 对 MCF-7 细胞周期的影响 | 第120页 |
| ·Bcl-2 和 Bax mRNA 表达水平的检测 | 第120-122页 |
| ·数据处理 | 第122页 |
| ·试验结果 | 第122-131页 |
| ·Ad-rhLTF 对 MCF-7 细胞增殖的影响 | 第122-123页 |
| ·Ad-rhLTF 转染 MCF-7 细胞后 hLTF 表达结果 | 第123-124页 |
| ·Ad-rhLTF 处理后 MCF-7 细胞形态学特征 | 第124-125页 |
| ·Hoechst 33342 荧光单染法检测 MCF-7 细胞凋亡 | 第125页 |
| ·AO/EB 荧光双染观察 MCF-7 细胞凋亡 | 第125-126页 |
| ·电镜观察 MCF-7 细胞凋亡 | 第126页 |
| ·Ad-rhLTF 影响 MCF-7 细胞线粒体膜电位的结果 | 第126-127页 |
| ·MCF-7 细胞经 AnnexinV-FITC 染色后流式细胞仪检测结果 | 第127页 |
| ·MCF-7 细胞 DNA 片段化分析结果 | 第127-128页 |
| ·MCF-7 细胞的 TUNEL 染色结果 | 第128-129页 |
| ·MCF-7 细胞周期检测结果 | 第129-130页 |
| ·细胞凋亡相关基因 Bcl-2 和 Bax 的 mRNA 表达 | 第130-131页 |
| ·讨论 | 第131-137页 |
| ·Ad-rhLTF 转染 MCF-7 细胞的评价 | 第132页 |
| ·Ad-rhLTF 对 MCF-7 细胞增殖能力的影响 | 第132页 |
| ·Ad-rhLTF 诱导 MCF-7 细胞凋亡形态学变化 | 第132-134页 |
| ·Ad-rhLTF 对线粒体膜电位的影响 | 第134页 |
| ·AnnexinV-FITC 凋亡检测结果评价 | 第134-135页 |
| ·DNA 片段化结果分析 | 第135页 |
| ·TUNEL 染色结果的评价 | 第135-136页 |
| ·Ad-rhLTF 对 MCF-7 细胞周期的影响 | 第136页 |
| ·Ad-rhLTF 诱导 MCF-7 细胞凋亡的分子机制 | 第136-137页 |
| ·本章小结 | 第137-138页 |
| 结论 | 第138-140页 |
| 参考文献 | 第140-152页 |
| 附录 | 第152-154页 |
| 攻读博士学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第154-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
| 作者简介 | 第157页 |
