| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| ·概述 | 第12-14页 |
| ·谷胱甘肽的性质及分布 | 第12-13页 |
| ·谷胱甘肽的生理功能 | 第13-14页 |
| ·谷胱甘肽的应用前景 | 第14页 |
| ·生物法合成谷胱甘肽的研究动态 | 第14-22页 |
| ·谷胱甘肽生产的历史 | 第14-15页 |
| ·发酵法生产谷胱甘肽 | 第15-16页 |
| ·酶法合成谷胱甘肽的关键问题 | 第16-22页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第22-24页 |
| ·酶法合成谷胱甘肽研究中仍存在的问题 | 第22-23页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 大肠杆菌腺苷脱氨酶缺失对耦合系统ATP 再生的影响 | 第24-35页 |
| ·前言 | 第24-25页 |
| ·材料与方法 | 第25-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·试剂和仪器 | 第25-26页 |
| ·分子生物学操作 | 第26页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第26-27页 |
| ·酿酒酵母 WSH2 培养方法 | 第27页 |
| ·重组大肠杆菌合成谷胱甘肽反应体系 | 第27页 |
| ·酿酒酵母利用腺苷和腺嘌呤合成 ATP 的反应体系 | 第27-28页 |
| ·耦合系统合成谷胱甘肽反应体系 | 第28页 |
| ·谷胱甘肽测定 | 第28页 |
| ·ATP 及相关物质测定 | 第28-29页 |
| ·结果与讨论 | 第29-33页 |
| ·腺苷脱氨酶缺失对大肠杆菌利用腺苷的影响 | 第29页 |
| ·腺苷脱氨酶缺失对大肠杆菌菌体生长和谷胱甘肽合成能力的影响 | 第29-30页 |
| ·外加ATP 下重组大肠杆菌合成谷胱甘肽反应体系中腺嘌呤核苷(酸)分析 | 第30-31页 |
| ·酿酒酵母 S. cerevisiae WSH2 以腺苷和腺嘌呤为底物合成 ATP 分析 | 第31页 |
| ·大肠杆菌腺苷脱氨酶缺失对耦合系统中谷胱甘肽合成和 ATP 再生的影响 | 第31-33页 |
| ·小结 | 第33-35页 |
| 第三章 大肠杆菌腺苷脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶缺失对其ATP 代谢的影响 | 第35-46页 |
| ·前言 | 第35页 |
| ·材料与方法 | 第35-38页 |
| ·菌株与质粒 | 第35-36页 |
| ·试剂与仪器 | 第36页 |
| ·分子生物学操作 | 第36-37页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第37页 |
| ·酿酒酵母 WSH2 培养方法 | 第37页 |
| ·重组大肠杆菌对外加腺苷和ATP 的代谢实验 | 第37页 |
| ·重组大肠杆菌合成谷胱甘肽反应体系 | 第37页 |
| ·耦合系统合成谷胱甘肽反应体系 | 第37-38页 |
| ·谷胱甘肽测定 | 第38页 |
| ·ATP 及相关物质测定 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-44页 |
| ·构建腺苷脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶双基因缺失菌株 | 第38-39页 |
| ·消除 E. coli JW1615 染色体中卡那霉素抗性基因 | 第39-40页 |
| ·构建大肠杆菌add/ade 双基因缺失菌株 | 第40-41页 |
| ·腺苷脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶缺失对大肠杆菌利用腺苷的影响 | 第41页 |
| ·腺苷脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶缺失对大肠杆菌利用 ATP 的影响 | 第41-42页 |
| ·腺苷脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶缺失对大肠杆菌菌体生长及 GSH 合成的影响 | 第42-43页 |
| ·外加 ATP 条件下重组大肠杆菌 E. coli Δadd /ade 合成谷胱甘肽过程中腺嘌呤核苷(酸)分析 | 第43页 |
| ·E.coli Δadd/ade (pBV03)和 S. cerevisiae WSH2 组成的耦合系统合成 GSH | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-46页 |
| 第四章 大肠杆菌生物合成谷胱甘肽过程中的关键降解酶 | 第46-60页 |
| ·前言 | 第46-47页 |
| ·材料与方法 | 第47-50页 |
| ·菌株与质粒 | 第47页 |
| ·试剂与仪器 | 第47-48页 |
| ·分子生物学操作 | 第48页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第48页 |
| ·单基因缺失菌株降解 GSH 实验 | 第48-49页 |
| ·重组大肠杆菌合成谷胱甘肽反应体系 | 第49页 |
| ·谷胱甘肽测定 | 第49页 |
| ·酶活性测定 | 第49页 |
| ·重组大肠杆菌对外加腺苷的代谢实验 | 第49页 |
| ·耦合系统合成谷胱甘肽反应体系 | 第49-50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-58页 |
| ·大肠杆菌合成谷胱甘肽过程中的降解分析 | 第50页 |
| ·大肠杆菌中降解谷胱甘肽的关键酶 | 第50-51页 |
| ·培养条件对大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶酶活性的影响 | 第51-53页 |
| ·大肠杆菌三肽酶缺失突变株合成 GSH 的研究 | 第53-54页 |
| ·重组大肠杆菌Δadd/ade/pepT 的构建过程 | 第54页 |
| ·消除重组大肠杆菌Δadd/ade 染色体中的卡那霉素抗性基因 | 第54-55页 |
| ·利用 Red 重组系统构建重组大肠杆菌Δadd/ade/pepT | 第55-56页 |
| ·重组大肠杆菌Δadd/ade/pepT 对腺苷的代谢 | 第56-57页 |
| ·腺苷脱氨酶、腺嘌呤脱氨酶及三肽酶缺失对菌体生长及 GSH 合成的影响 | 第57页 |
| ·耦合系统合成 GSH | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第五章 用于生物合成 GSH 的大肠杆菌细胞通透性处理方式 | 第60-67页 |
| ·前言 | 第60页 |
| ·材料与方法 | 第60-62页 |
| ·菌株与质粒 | 第60-61页 |
| ·试剂与仪器 | 第61页 |
| ·分子生物学操作 | 第61页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第61页 |
| ·重组大肠杆菌合成谷胱甘肽反应体系 | 第61页 |
| ·谷胱甘肽测定 | 第61-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-66页 |
| ·重组大肠杆菌 JW1667 (pBV03)的构建过程 | 第62-63页 |
| ·大肠杆菌lpp 基因敲除对细胞生长代谢的影响 | 第63页 |
| ·大肠杆菌lpp 基因敲除对其合成 GSH 能力的影响 | 第63-65页 |
| ·lpp 基因敲除和甲苯直接处理对重复利用大肠杆菌细胞生物合成 GSH 的影响 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第六章 用于生物合成谷胱甘肽的 ATP 再生系统运行机制 | 第67-77页 |
| ·前言 | 第67页 |
| ·材料与方法 | 第67-68页 |
| ·菌株与质粒 | 第67页 |
| ·试剂与仪器 | 第67-68页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第68页 |
| ·酿酒酵母 WSH2 培养方法 | 第68页 |
| ·酿酒酵母 WSH2 对外加腺苷和腺嘌呤的代谢实验 | 第68页 |
| ·耦合系统合成谷胱甘肽反应体系 | 第68页 |
| ·谷胱甘肽、ATP 及相关物质测定 | 第68页 |
| ·结果与讨论 | 第68-75页 |
| ·用于生物合成 GSH 的耦合系统中腺苷类物质代谢分析 | 第68-70页 |
| ·酿酒酵母 WSH2 中腺苷和腺嘌呤代谢分析 | 第70-71页 |
| ·酿酒酵母中腺嘌呤脱氨酶酶活性对耦合系统 ATP 代谢和 GSH 合成能力的影响 | 第71-72页 |
| ·推迟重组大肠杆菌耦合对耦合系统合成GSH 的影响 | 第72-74页 |
| ·重组大肠杆菌和酿酒酵母构建的生物合成 GSH 的耦合系统运转机制 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-77页 |
| 结论 | 第77-79页 |
| 论文创新点 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-93页 |
| 附录I：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第93-94页 |
| 附录II：英文缩写与中文名称对照 | 第94页 |
