| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 符号说明及缩写词 | 第18-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-44页 |
| ·粘细菌简介 | 第21-27页 |
| ·粘细菌的典型特征及分类 | 第21-24页 |
| ·粘细菌产生的次级代谢产物 | 第24-27页 |
| ·纤维堆囊菌的特征 | 第27-36页 |
| ·纤维堆囊菌的基本性质 | 第27-29页 |
| ·纤维堆囊菌生长的细胞密度依赖性 | 第29页 |
| ·纤维堆囊菌产生的次级代谢产物 | 第29-30页 |
| ·聚酮类天然产物及其生物合成特征 | 第30-33页 |
| ·埃博霉素生物学研究 | 第33-36页 |
| ·纤维堆囊菌的遗传学研究 | 第36-42页 |
| ·细菌接合转移 | 第37-39页 |
| ·自然转化 | 第39-40页 |
| ·纤维堆囊菌遗传操作体系 | 第40-42页 |
| ·本文工作开展思路及研究内容 | 第42-44页 |
| 第二章 纤维堆囊菌接合转移体系建立 | 第44-86页 |
| ·实验材料与仪器试剂 | 第45-49页 |
| ·菌株及质粒 | 第45页 |
| ·主要培养基 | 第45-46页 |
| ·主要实验试剂 | 第46-48页 |
| ·主要仪器设备与耗材 | 第48-49页 |
| ·数据库及分析软件 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-68页 |
| ·纤维堆囊菌菌体培养 | 第49-50页 |
| ·诱动接合转移载体构建 | 第50-62页 |
| ·基因组DNA提取及部分消化 | 第50-51页 |
| ·目的片段PCR扩增及后处理 | 第51-54页 |
| ·质粒载体的酶切及连接转化 | 第54-56页 |
| ·载体构建流程图 | 第56-62页 |
| ·纤维堆囊菌与大肠杆菌间的接合转移 | 第62-63页 |
| ·纤维堆囊菌与大肠杆菌间接合转移条件摸索 | 第62页 |
| ·改进的抗生素添加接合转移方法 | 第62-63页 |
| ·纤维堆囊菌接合子PCR验证及Slot bolt杂交验证 | 第63-66页 |
| ·大肠杆菌间的接合转移 | 第66-68页 |
| ·实验结果与讨论 | 第68-84页 |
| ·纤维堆囊菌菌株性质 | 第68-71页 |
| ·诱动接合转移载体pCMT61的构建 | 第71-75页 |
| ·质粒pT19的构建 | 第71-73页 |
| ·质粒pCC11的构建 | 第73-74页 |
| ·质粒pCCMT61的构建 | 第74-75页 |
| ·So0157-2抗生素添加接合转移方法建立 | 第75-76页 |
| ·So0157-2接合子验证 | 第76-78页 |
| ·同源片段大小对接合转移效率的影响 | 第78-79页 |
| ·不同纤维堆囊菌接合转移效率比较 | 第79-81页 |
| ·抗生素对大肠杆菌间接合转移效率的影响 | 第81-84页 |
| ·本章小结 | 第84-86页 |
| 第三章 纤维堆囊菌自然转化现象的发现及初步探索 | 第86-98页 |
| ·实验材料 | 第86-88页 |
| ·菌株及质粒 | 第86-87页 |
| ·培养基及试剂 | 第87页 |
| ·主要仪器设备与耗材 | 第87-88页 |
| ·实验方法 | 第88-91页 |
| ·纤维堆囊菌菌株培养 | 第88页 |
| ·纤维堆囊菌自然转化实验 | 第88页 |
| ·纤维堆囊菌自然感受态形成时间确定 | 第88-89页 |
| ·转化子的PCR扩增验证 | 第89页 |
| ·转化子的荧光原位杂交验证 | 第89-90页 |
| ·纤维堆囊菌So0003-3自然转化条件分析 | 第90-91页 |
| ·纤维堆囊菌So0003-3子实体CaCl_2转化 | 第91页 |
| ·实验结果与讨论 | 第91-97页 |
| ·纤维堆囊菌So0003-3形态观察 | 第91-92页 |
| ·纤维堆囊菌So0003-3自然转化的发现及转化子验证 | 第92-94页 |
| ·纤维堆囊菌自然感受态形成时间确定 | 第94-95页 |
| ·纤维堆囊菌So0003-3自然转化的条件分析 | 第95-96页 |
| ·转化方法在纤维堆囊菌中的改进以及初步应用 | 第96-97页 |
| ·本章小结 | 第97-98页 |
| 第四章 纤维堆囊菌中埃博霉素生物合成改造及代谢调控改造 | 第98-138页 |
| ·实验材料 | 第99-101页 |
| ·菌株及质粒 | 第99-100页 |
| ·培养基及试剂 | 第100页 |
| ·实验仪器 | 第100页 |
| ·软件工具及数据库 | 第100-101页 |
| ·实验方法 | 第101-112页 |
| ·埃博霉素生物合成改造载体的构建 | 第101-108页 |
| ·引物设计与产物扩增 | 第101-103页 |
| ·PCR产物平末端化 | 第103页 |
| ·粘粒cosmid6大量提取及质粒酶切测序 | 第103-104页 |
| ·载体构建流程图 | 第104-108页 |
| ·纤维堆囊菌So0157-2接合转移及接合子筛选 | 第108-109页 |
| ·纤维堆囊菌接合子保存及纯化 | 第109-110页 |
| ·纤维堆囊菌固体平板发酵 | 第110页 |
| ·发酵产物HPLC及LC-MS检测分析 | 第110-112页 |
| ·实验结果与讨论 | 第112-137页 |
| ·MT结构域位点失活载体pCMC34的构建 | 第112-114页 |
| ·KR7结构域位点失活载体pCDM7的构建 | 第114-115页 |
| ·一次同源重组突变子发酵产物的HPLC及MS分析 | 第115-124页 |
| ·二次同源重组突变子发酵产物HPLC及MS分析 | 第124-127页 |
| ·埃博霉素碳骨架缩小初步探索 | 第127-131页 |
| ·埃博霉素代谢调控改造 | 第131-137页 |
| ·本章小结 | 第137-138页 |
| 总结与展望 | 第138-140页 |
| 附录 | 第140-144页 |
| 参考文献 | 第144-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第155-156页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第156-157页 |
| 英文论文一 | 第157-175页 |
| 英文论文二 | 第175-194页 |
