| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-28页 |
| ·激发子及其受体 | 第11-15页 |
| ·激发子研究 | 第11页 |
| ·激发子受体 | 第11-12页 |
| ·细胞内激发子信号传递 | 第12-13页 |
| ·激发子参与病害综合防治的前景与展望 | 第13-15页 |
| ·丝氨酸蛋白酶 | 第15-18页 |
| ·丝氨酸蛋白酶概况 | 第15页 |
| ·丝氨酸蛋白酶结构与功能 | 第15-17页 |
| ·丝氨酸蛋白酶在毕赤酵母系统中的表达 | 第17-18页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第18-27页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交系统构成 | 第20页 |
| ·酵母双杂交系统的优点 | 第20-21页 |
| ·酵母双杂交系统的缺陷 | 第21页 |
| ·酵母双杂交的改进 | 第21-24页 |
| ·酵母双杂交技术的发展 | 第24-25页 |
| ·酵母双杂交在蛋白质相互作用中的应用 | 第25-27页 |
| ·本研究的意义 | 第27-28页 |
| 2 丝氨酸蛋白酶在毕赤酵母中的表达 | 第28-47页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·培养基母液及培养基 | 第28-29页 |
| ·主要生化试剂 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-34页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因的获得及信息学分析 | 第30页 |
| ·稻瘟病菌总RNA的提取 | 第30页 |
| ·DNaseI处理去除稻瘟病菌基因组DNA | 第30-31页 |
| ·RT-PCR | 第31页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第31页 |
| ·热击转化法 | 第31页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第31页 |
| ·毕赤酵母电转化 | 第31-32页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第32-33页 |
| ·最佳产酶时间的检测 | 第33页 |
| ·利用His标签纯化丝氨酸蛋白酶 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-44页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·稻瘟菌丝氨酸蛋白酶的生物信息学分析 | 第36-40页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第40-43页 |
| ·丝氨酸蛋白酶的表达 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| ·表达菌株和表达载体 | 第44-45页 |
| ·表达纯化的丝氨酸白酶 | 第45-47页 |
| 3 酵母双杂交方法筛选丝氨酸蛋白酶的受体 | 第47-65页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47-48页 |
| ·主要生化试剂 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-53页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因的获得 | 第48-49页 |
| ·酵母表达质粒pBD-GAL4-ser载体的构建 | 第49页 |
| ·AH109感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| ·pBD-GAL4-ser质粒转入 AH109进行自激活检测 | 第50页 |
| ·重组诱饵质粒毒性检测 | 第50-51页 |
| ·p-AD-Library与pBD-GAL4-ser共转入酵母细胞 | 第51页 |
| ·利用营养缺陷平板进行第一轮筛选 | 第51页 |
| ·利用X-gal平板进行第二轮筛选 | 第51页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第51-52页 |
| ·转化大肠杆菌,获得猎物质粒 | 第52页 |
| ·PCR扩增p-AD-X中插入的片段X | 第52页 |
| ·一对一酵母双杂交系统的回复性实验确定阳性克隆 | 第52-53页 |
| ·DNA序列测定与生物信息学初步分析 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-62页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因的获得 | 第53页 |
| ·酵母表达质粒pBD-GAL4-ser载体的构建 | 第53-55页 |
| ·AH109酵母菌株表型验证 | 第55页 |
| ·酵母表达质粒pBD-GAL4-ser载体转入AH109菌株及其阳性克隆的验证 | 第55-56页 |
| ·酵母表达质粒pBD-GAL4-ser的自激活检测和毒性检测 | 第56-57页 |
| ·p-AD-Library与pBD-GAL4-ser共转入酵母细胞 | 第57-58页 |
| ·阳性克隆的分析与鉴定 | 第58-59页 |
| ·一对一酵母双杂交系统的回复性实验确定阳性克隆 | 第59-60页 |
| ·DNA序列测定与生物信息学初步分析 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| ·酵母双杂交获得的蛋白互作需要多种方法验证 | 第62页 |
| ·丝氨酸蛋白酶受体的筛选 | 第62-63页 |
| ·阳性克隆菌株的序列分析 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
