| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-33页 |
| ·鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)研究进展 | 第17-23页 |
| ·IBDV的形态结构 | 第18页 |
| ·IBDV的基因组结构 | 第18-19页 |
| ·IBDV的编码蛋白及非编码区 | 第19-23页 |
| ·动物RNA病毒的反向遗传操作系统 | 第23-26页 |
| ·体外转录拯救系统 | 第23-24页 |
| ·基于T7 RNA聚合酶的体内转录系统 | 第24-25页 |
| ·RNA聚合酶Ⅰ拯救系统 | 第25-26页 |
| ·RNA聚合酶Ⅱ拯救系统 | 第26页 |
| ·鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的拯救系统 | 第26-27页 |
| ·鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的反向遗传操作研究 | 第27-31页 |
| ·关于IBDV细胞嗜性的研究 | 第27-28页 |
| ·关于IBDV毒力分子基础的研究 | 第28-29页 |
| ·标记疫苗研究 | 第29-30页 |
| ·对非编码区功能的研究 | 第30-31页 |
| ·问题与展望 | 第31-32页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 第二章 鸡传染性法氏囊病病毒GT株全基因组克隆与序列分析 | 第33-40页 |
| ·材料与方法 | 第33-36页 |
| ·病毒、细胞、质粒和菌种 | 第33页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·引物设计与合成 | 第34页 |
| ·IBDV全基因组RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·IBDV全基因组的反转录 | 第35页 |
| ·IBDV全基因组cDNA的扩增与克隆 | 第35页 |
| ·F9代毒VP2基因的扩增与克隆 | 第35-36页 |
| ·IBDV Gt株全基因组及F9代毒VP2序列分析 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-39页 |
| ·IBDV Gt株全基因组的克隆 | 第36页 |
| ·F9代毒VP2基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·基因组遗传演化分析 | 第37-38页 |
| ·基因组序列分析 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 鸡传染性法氏囊病病毒反向遗传操作系统的建立 | 第40-56页 |
| ·材料与方法 | 第41-47页 |
| ·病毒、细胞与单克隆抗体 | 第41页 |
| ·质粒和菌种 | 第41页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·引物设计与合成 | 第41-42页 |
| ·分子标签引入 | 第42-43页 |
| ·核酶结构引入 | 第43-44页 |
| ·全基因组真核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·病毒拯救 | 第45-46页 |
| ·拯救病毒RT-PCR及分子标签鉴定 | 第46页 |
| ·拯救病毒间接免疫荧光鉴定 | 第46页 |
| ·拯救病毒电镜检查 | 第46页 |
| ·拯救毒与亲本毒复制动力学比较 | 第46-47页 |
| ·IBDV反向遗传操作系统的细胞普适性与稳定性 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-52页 |
| ·IBDV全基因组分子标签的引入 | 第47-48页 |
| ·核酶结构的引入 | 第48页 |
| ·全基因组真核表达载体的构建 | 第48页 |
| ·病毒的拯救 | 第48-49页 |
| ·拯救病毒RT-PCR及序列测定 | 第49页 |
| ·拯救病毒间接免疫荧光鉴定 | 第49-51页 |
| ·拯救病毒电镜检查 | 第51页 |
| ·拯救毒与亲本毒复制动力学比较 | 第51页 |
| ·IBDV反向遗传操作系统的细胞普适性与稳定性 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-56页 |
| ·RNA聚合酶Ⅱ介导的IBDV拯救系统 | 第52-53页 |
| ·点突变方法与分子标签 | 第53页 |
| ·核酶与基因组的完整性 | 第53页 |
| ·基因组的保真性与病毒的拯救 | 第53-54页 |
| ·IBDV反向遗传操作系统的细胞普适性与高效率 | 第54页 |
| ·影响病毒拯救效率的其他因素 | 第54-55页 |
| ·判定病毒拯救成功的指标 | 第55-56页 |
| 第四章 鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因功能的研究 | 第56-79页 |
| ·材料与方法 | 第57-63页 |
| ·病毒、细胞和质粒 | 第57页 |
| ·SPF鸡 | 第57页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·引物设计与合成 | 第57-58页 |
| ·Gt株VP2替换Gx株VP2 | 第58-60页 |
| ·F9代毒VP2替换Gx株VP2 | 第60-61页 |
| ·F9代毒VP2替换Gt株VP2 | 第61页 |
| ·Gx株B节段真核表达载体的构建 | 第61页 |
| ·VP2基因替换的嵌合病毒拯救 | 第61-62页 |
| ·嵌合病毒的鉴定 | 第62页 |
| ·嵌合病毒复制动力学试验 | 第62页 |
| ·嵌合病毒毒力试验 | 第62页 |
| ·试验鸡法氏囊病毒分离 | 第62页 |
| ·试验鸡法氏囊RT-PCR与序列测定 | 第62-63页 |
| ·试验鸡血清抗体效价的测定 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-73页 |
| ·替换Gt株VP2的Gx株A节段真核表达载体的构建 | 第63页 |
| ·替换F9代毒VP2的Gx株A节段真核表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·替换F9代毒VP2的Gt株A节段真核表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·Gx株B节段真核表达载体的构建 | 第65页 |
| ·VP2基因替换的嵌合病毒拯救 | 第65页 |
| ·嵌合病毒的RT-PCR及序列测定 | 第65-66页 |
| ·嵌合病毒的间接免疫荧光鉴定 | 第66页 |
| ·嵌合病毒的电镜观察 | 第66-67页 |
| ·嵌合病毒复制动力学研究 | 第67-68页 |
| ·试验鸡的症状 | 第68页 |
| ·试验鸡的剖检病变 | 第68-70页 |
| ·试验鸡的囊重比与囊指数 | 第70页 |
| ·试验鸡法氏囊的组织病理变化 | 第70-72页 |
| ·试验鸡法氏囊病毒分离 | 第72页 |
| ·试验鸡法氏囊的RT-PCR与序列测定 | 第72页 |
| ·试验鸡血清抗体效价的测定结果 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-79页 |
| ·VP2的253和284位氨基酸决定IBDV细胞嗜性 | 第73-74页 |
| ·VP2的222等7个氨基酸与IBDV在CEF上的复制有关 | 第74-75页 |
| ·VP2的253和284位氨基酸是IBDV的重要毒力位点 | 第75页 |
| ·VP2的222等7个氨基酸是IBDV潜在的毒力位点 | 第75-76页 |
| ·VP2不是影响IBDV复制和毒力的唯一因素 | 第76页 |
| ·氨基酸突变影响IBDV细胞嗜性、复制和毒力的可能机理 | 第76-77页 |
| ·融合PCR与基因替换 | 第77-78页 |
| ·不完全酶切在基因克隆中的应用 | 第78-79页 |
| 第五章 鸡传染性法氏囊病病毒VP3和VP4基因功能的研究 | 第79-89页 |
| ·材料与方法 | 第79-82页 |
| ·病毒、细胞和质粒 | 第79页 |
| ·SPF鸡 | 第79页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第79-80页 |
| ·主要仪器 | 第80页 |
| ·Gx株和Gt株A节段的亚克隆 | 第80页 |
| ·Gx株VP3/3’NCR替换Gt株相应区域 | 第80页 |
| ·Gx株VP4/VP3/3’NCR替换Gt株相应区域 | 第80页 |
| ·Gx株VP4替换Gt株相应区域 | 第80页 |
| ·嵌合A节段核酶结构的引入 | 第80-81页 |
| ·嵌合A节段真核表达载体的构建 | 第81页 |
| ·嵌合病毒的拯救 | 第81页 |
| ·嵌合病毒的鉴定 | 第81-82页 |
| ·嵌合病毒复制动力学研究 | 第82页 |
| ·嵌合病毒毒力研究 | 第82页 |
| ·试验鸡法氏囊病毒分离与鉴定 | 第82页 |
| ·试验鸡法氏囊RT-PCR与序列测定 | 第82页 |
| ·试验鸡的血清抗体效价测定 | 第82页 |
| ·结果 | 第82-86页 |
| ·嵌合A节段真核表达载体的构建 | 第82页 |
| ·嵌合病毒的拯救 | 第82-83页 |
| ·嵌合病毒RT-PCR及序列测定 | 第83-84页 |
| ·嵌合病毒的间接免疫荧光鉴定 | 第84页 |
| ·嵌合病毒的电镜观察 | 第84页 |
| ·嵌合病毒复制动力学研究 | 第84-85页 |
| ·试验鸡的症状与剖检变化 | 第85-86页 |
| ·试验鸡的囊重比与囊指数 | 第86页 |
| ·试验鸡法氏囊的RT-PCR与序列测定 | 第86页 |
| ·试验鸡法氏囊的病毒分离 | 第86页 |
| ·试验鸡的血清抗体效价 | 第86页 |
| ·讨论 | 第86-89页 |
| ·VP3影响IBDV在CEF上的复制 | 第86-88页 |
| ·VP4不影响IBDV在CEF上的复制 | 第88页 |
| ·VP3、VP4不影响IBDV的毒力 | 第88-89页 |
| 第六章 结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-103页 |
| 附录 | 第103-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 作者简历 | 第124-125页 |
