| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| ·前言 | 第11页 |
| ·生物固氮的遗传工程 | 第11-13页 |
| ·固氮遗传工程的研究概述 | 第11-12页 |
| ·固氮基因表达调节机理的研究进展 | 第12-13页 |
| ·氮同化代谢 | 第13-14页 |
| ·铵转运系统 | 第14-20页 |
| ·铵转运 | 第14页 |
| ·铵载体基因分布 | 第14-15页 |
| ·铵载体蛋白AmtB | 第15页 |
| ·铵转运系统 | 第15-18页 |
| ·铵载体基因amtB研究进展 | 第18-19页 |
| ·模式菌株大肠杆菌的amt转运机制研究进展 | 第19-20页 |
| ·代表性模式菌株菌株的Amt的结构和功能研究 | 第20-25页 |
| ·自生固氮菌A.vinelandii中glnK-amtB操纵子的特征和功能研究 | 第20-21页 |
| ·联合固氮菌A.brasilense的amt特征和功能研究 | 第21-23页 |
| ·E.coli中AmtB蛋白可以作为模式系统理解铵转运 | 第23-25页 |
| ·立题依据 | 第25-26页 |
| ·技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 铵转运基因amtB的基因克隆以及结构预测 | 第27-36页 |
| ·培养基与抗生素 | 第27-28页 |
| ·常用的菌株 | 第27页 |
| ·A15限制性培养基 | 第27-28页 |
| ·酶、试剂及试剂盒 | 第28页 |
| ·克隆amB12完整基因所用的引物 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·A1501菌株基因组DNA的分离 | 第28-29页 |
| ·PCR(Polymerase Chain Reaction) | 第29页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第29页 |
| ·酶切及连接反应 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第30页 |
| ·高效率转化感受态细胞的制备、转化 | 第30-31页 |
| ·碱裂解法小量提取细菌质粒DNA | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·amtB12基因完整序列的克隆 | 第31-33页 |
| ·铵转运载体蛋白结构预测 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 铵转运载体基因amtB的功能研究 | 第36-54页 |
| ·材料与方法 | 第36-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·引物 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-42页 |
| ·DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增反应 | 第38页 |
| ·极性突变株DNA片段与非极性突变株DNA片段的克隆 | 第38页 |
| ·pK18mobF与pK18mobG的构建 | 第38-39页 |
| ·载体和目标片段的连接 | 第39页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第39页 |
| ·质粒的接合转移 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的PCR检测 | 第40页 |
| ·野生型与突变株生长曲线的测定 | 第40页 |
| ·靛酚蓝比色法测定NH_4~+浓度 | 第40页 |
| ·菌株生长曲线的测定 | 第40-41页 |
| ·菌株固氮活性测定 | 第41页 |
| ·总蛋白的测定 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-53页 |
| ·极性突变株的构建 | 第42-43页 |
| ·amtB1极性突变株TB12的理化特性 | 第43-45页 |
| ·amtB1和amtB2基因整合突变株的构建 | 第45页 |
| ·amtB1和amtB2基因整合突变株的PCR验证 | 第45-47页 |
| ·amtB1非极性突变株的验证 | 第47页 |
| ·amtB1基因表达质粒pLAB1的构建 | 第47-48页 |
| ·amtB1基因表达质粒pLAB1的构建过程 | 第48-49页 |
| ·突变株的表型检测 | 第49-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 结论 | 第54-55页 |
| 附录1 突变株和野生菌株定殖能力的初步研究 | 第55-59页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·菌株 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·水稻根表定植试验 | 第55-56页 |
| ·结果和分析 | 第56-59页 |
| ·突变株根表定殖的平板记数 | 第56页 |
| ·TB12极性突变株与野生型在根表竞争比较 | 第56-57页 |
| ·TB12极性突变株与野生型对水稻接种效应 | 第57-59页 |
| 附录2 | 第59-61页 |
| 附录3 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
