| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 第一章 问题提出与研究进展 | 第16-34页 |
| ·课题的提出 | 第16-17页 |
| ·文献综述 | 第17-33页 |
| ·果实钙营养生理研究进展 | 第17-24页 |
| ·根系对钙的吸收与运输 | 第18页 |
| ·果实对钙的吸收、运输与分布特性及其影响因素 | 第18-21页 |
| ·果实对钙的吸收、运输与分布特性 | 第18-20页 |
| ·影响果实对钙的吸收、运输与分布的因素 | 第20-21页 |
| ·果实细胞水平上Ca~(2+)的吸收、运输与分布规律 | 第21-22页 |
| ·果实钙的生理功能 | 第22-23页 |
| ·钙与果实生理失调及其矫正 | 第23-24页 |
| ·钙调素(CaM)的研究进展 | 第24-27页 |
| ·植物CaM的基本结构 | 第25页 |
| ·钙调素蛋白亚型 | 第25-26页 |
| ·CaM的基因表达 | 第26页 |
| ·CaM生理功能的研究 | 第26-27页 |
| ·生长素信号转导研究进展 | 第27-30页 |
| ·生长素调节基因的表达 | 第28-29页 |
| ·SAUR | 第28页 |
| ·GH3 | 第28页 |
| ·Aux/IAA | 第28-29页 |
| ·Aux/IAA基因的表达特点 | 第29页 |
| ·Aux/IAA基因结构特点及其功能 | 第29页 |
| ·Aux/IAA蛋白和ARF调节生长素反应基因表达的可能机制 | 第29-30页 |
| ·ARF介导的生长素诱导基因表达的改变 | 第29-30页 |
| ·Aux/IAA蛋白阻遏ARF的功能 | 第30页 |
| ·原位杂交技术概述 | 第30-33页 |
| ·RNA原位杂交的基本原理 | 第31页 |
| ·RNA原位杂交在植物基因表达研究中的应用 | 第31-33页 |
| ·基因表达定位 | 第31-32页 |
| ·分离基因的功能分析 | 第32页 |
| ·基因家族的功能差异分析 | 第32-33页 |
| ·外源基因在转基因植物中的表达定位 | 第33页 |
| ·外源刺激引起的基因表达定位 | 第33页 |
| ·本研究的目的和内容 | 第33-34页 |
| 第二章 钙调素基因的克隆及分析 | 第34-52页 |
| ·前言 | 第34页 |
| ·材料与方法 | 第34-41页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·菌株、质粒及试剂 | 第34-35页 |
| ·RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·玻璃和塑料制品的处理 | 第35页 |
| ·溶液的配制 | 第35页 |
| ·RNA提取步骤 | 第35-36页 |
| ·cDNA合成 | 第36页 |
| ·DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·基因克隆 | 第37-40页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·目的片段的回收 | 第38页 |
| ·TA克隆 | 第38-39页 |
| ·质粒提取 | 第39-40页 |
| ·PCR检测及序列测定 | 第40页 |
| ·序列分析 | 第40页 |
| ·Southern杂交 | 第40-41页 |
| ·DNA酶切与电泳分离 | 第40页 |
| ·Southern印迹 | 第40-41页 |
| ·预杂交 | 第41页 |
| ·探针标记 | 第41页 |
| ·杂交 | 第41页 |
| ·洗膜 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-50页 |
| ·总RNA提取和cDNA单链合成 | 第41-42页 |
| ·钙调素基因的克隆与序列分析 | 第42-49页 |
| ·钙调素基因的体外扩增、克隆与筛选 | 第42-43页 |
| ·钙调素基因的序列分析 | 第43-46页 |
| ·柑桔钙调素DNA序列分析 | 第46-49页 |
| ·钙调素理化性质分析 | 第49页 |
| ·钙调素的结构分析 | 第49页 |
| ·柑橘(国庆4号和华农本地早橘)钙调素拷贝数分析 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 钙调素(CuCaM)在梨子房和幼果及种子发育过程中的表达研究 | 第52-64页 |
| ·前言 | 第52页 |
| ·材料与方法 | 第52-57页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·RNA的提取 | 第53页 |
| ·Northern杂交 | 第53页 |
| ·mRNA原位杂交 | 第53-56页 |
| ·石蜡切片 | 第53-54页 |
| ·制片 | 第54页 |
| ·探针制备 | 第54-55页 |
| ·质粒DNA提取 | 第54页 |
| ·质粒DNA的线形化 | 第54页 |
| ·地高辛标记的体外转录 | 第54-55页 |
| ·点印渍法检测标记效果 | 第55页 |
| ·预杂交 | 第55页 |
| ·杂交 | 第55-56页 |
| ·杂交缓冲液和探针体积计算 | 第55页 |
| ·溶液配制 | 第55页 |
| ·杂交 | 第55-56页 |
| ·杂交后处理 | 第56页 |
| ·免疫反应 | 第56页 |
| ·显色反应 | 第56页 |
| ·封片观察 | 第56页 |
| ·梨种子生长过程中钙调素基因表达的RT-PCR分析 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-62页 |
| ·RNA的提取与表达 | 第57页 |
| ·CuCaM在梨子房/幼果中的表达 | 第57-58页 |
| ·Northern杂交 | 第57页 |
| ·组织原位表达 | 第57-58页 |
| ·CuCaM在梨子房和幼果中表达的部位 | 第58-59页 |
| ·CuCaM在梨子房和幼果中表达时期的动态变化 | 第59-61页 |
| ·梨种子钙调素基因表达的RT-PCR分析 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| ·高质量RNA的提取 | 第62页 |
| ·CuCaM的表达与Ca~(2+)吸收 | 第62页 |
| ·CuCaM的表达部位 | 第62-63页 |
| ·种子CuCaM表达分析 | 第63页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| 第四章 CuCaM在柑橘子房和幼果及体细胞胚胎发生过程中的表达研究 | 第64-76页 |
| ·前言 | 第64-65页 |
| ·材料与方法 | 第65页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·体细胞胚胎诱导 | 第65页 |
| ·RNA的提取 | 第65页 |
| ·mRNA原位杂交 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-72页 |
| ·CuCaM在华农本地早橘子房和幼果中的表达 | 第65-69页 |
| ·Northern杂交 | 第65-66页 |
| ·组织原位表达 | 第66页 |
| ·CuCaM在华农本地早橘子房和幼果中表达的部位 | 第66-68页 |
| ·CuCaM在华农本地早橘子房和幼果中表达时期的动态变化 | 第68-69页 |
| ·CuCaM在温州蜜柑子房和幼果中的表达 | 第69-70页 |
| ·Northern杂交 | 第69页 |
| ·CuCaM在温州蜜柑子房和幼果中表达的部位 | 第69-70页 |
| ·CuCaM在温州蜜柑子房和幼果中表达时期的动态变化 | 第70页 |
| ·CuCaM在默科特橘橙体细胞胚胎发生过程中的表达 | 第70-72页 |
| ·默科特橘橙愈伤组织体胚发生的情况 | 第70-71页 |
| ·CuCaM在默科特橘橙体细胞胚胎发生过程中的表达 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-76页 |
| ·CuCaM在柑橘盛花前后子房和幼果中的表达及其意义 | 第72-74页 |
| ·CuCaM在体胚发生过程中的表达 | 第74-76页 |
| ·默科特橘橙愈伤组织的体细胞胚胎发生 | 第74页 |
| ·钙调素在体细胞胚胎发生中的作用 | 第74-76页 |
| 第五章 Aux/IAA的基因克隆和表达研究 | 第76-95页 |
| ·前言 | 第76页 |
| ·材料与方法 | 第76-77页 |
| ·Aux/IAA基因的克隆 | 第76页 |
| ·Aux/IAA基因克隆转化及序列分析 | 第76-77页 |
| ·Southern杂交 | 第77页 |
| ·体细胞胚胎发生 | 第77页 |
| ·纽荷尔脐橙体细胞胚胎诱导 | 第77页 |
| ·2,4-D处理对伏令夏橙体细胞胚胎发生的影响 | 第77页 |
| ·mRNA原位杂交 | 第77页 |
| ·结果与分析 | 第77-91页 |
| ·Aux/IAA基因的克隆与序列分析 | 第77-85页 |
| ·Aux/IAA基因的克隆 | 第77-78页 |
| ·红肉脐橙CsAux的序列分析结果 | 第78-79页 |
| ·温州蜜柑CuAux的序列分析结果 | 第79-83页 |
| ·CuAux与CsAux氨基酸序列相似性比较 | 第83页 |
| ·柑橘Aux/IAA基因拷贝数分析 | 第83-85页 |
| ·CsAux的基因组拷贝数分析 | 第83-84页 |
| ·CuAux的基因组拷贝数分析 | 第84-85页 |
| ·Aux/IAA基因在柑橘子房和幼果中的表达 | 第85-88页 |
| ·CsAux基因在华农本地早橘盛花前后子房和幼果中的表达 | 第85-86页 |
| ·CsAux基因在华农本地早橘子房和幼果中表达时期的动变化 | 第86-87页 |
| ·CsAux基因在温州蜜柑子房和幼果中的表达 | 第87-88页 |
| ·CsAux基因在温州蜜柑子房和幼果中表达的部位 | 第87页 |
| ·CsAux基因在温州蜜柑子房和幼果中表达时期的动态变化 | 第87-88页 |
| ·CsAux基因在体细胞胚胎发生过程中的表达 | 第88-90页 |
| ·纽荷尔脐橙愈伤组织体胚发生的情况 | 第88-89页 |
| ·CsAux基因在纽荷尔脐橙体细胞胚胎发生过程中的表达 | 第89-90页 |
| ·2,4-D处理对体细胞胚胎发生和CsAux表达的影响 | 第90-91页 |
| ·2,4-D处理对伏令夏橙体细胞胚胎发生能力的影响 | 第90-91页 |
| ·CsAux在2,4-D处理的伏令夏橙胚性愈伤组织中的表达 | 第91页 |
| ·讨论 | 第91-95页 |
| ·Aux/IAA基因 | 第91页 |
| ·CsAux在柑橘子房和幼果中的表达 | 第91-93页 |
| ·CsAux在柑橘体细胞胚胎发生中的表达 | 第93页 |
| ·CsAux在2,4-D处理的伏令夏橙胚性愈伤组织中的表达 | 第93-95页 |
| 第六章 总讨论 | 第95-101页 |
| ·受精作用与基因表达 | 第95-96页 |
| ·钙调素和CsAux在胚胎发生中的作用意义 | 第96-98页 |
| ·钙调素和CsAux在合子胚发生中的意义 | 第96页 |
| ·钙调素和CsAux在合子胚发生中的意义 | 第96-97页 |
| ·2,4-D处理对体细胞胚胎发生和CsAux的表达影响 | 第97-98页 |
| ·果实钙吸收的可能机制 | 第98-99页 |
| ·结论 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-118页 |
| 图版和说明 | 第118-131页 |
| 附录Ⅰ 发表论文 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132页 |
