| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-19页 |
| 1. 芳香族化合物生物降解的研究现状 | 第10-11页 |
| 2. 细菌生物降解途径的遗传与进化 | 第11-12页 |
| 3. 咔唑降解途径和联苯双加氧酶的研究 | 第12-17页 |
| ·咔唑降解途径 | 第12-14页 |
| ·联苯双加氧酶基因簇的研究 | 第14-16页 |
| ·咔唑降解基因簇与联苯降解基因簇的相关性 | 第16-17页 |
| 4. 基因工程菌在芳香族化合物生物降解中的应用 | 第17-18页 |
| 5. 本研究工作的意义及目的 | 第18-19页 |
| 第一章、咔唑降解菌株的富集培养与菌种鉴定 | 第19-32页 |
| 1. 材料与方法 | 第20-26页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·实验仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-26页 |
| ·咔唑降解菌株的富集培养 | 第22页 |
| ·细菌的革兰氏染色 | 第22页 |
| ·165 rDNA 基因的克隆与鉴定 | 第22-26页 |
| ·插入片段的序列测定及分析 | 第26页 |
| ·PJ053 在不同pH条件下生长曲线的测定 | 第26页 |
| 2. 结果 | 第26-30页 |
| ·样品的富集培养与菌种的分离纯化 | 第26-27页 |
| ·菌株的165 rDNA 分子生物学鉴定 | 第27-28页 |
| ·PJ053 菌株的特性分析 | 第28-30页 |
| 3. 讨论 | 第30-32页 |
| 第二章 PJ053 菌株中2 , 3 -二羟基联苯双加氧酶(23DHBD) 基因和3, 4 -二羟苯乙酸-2 , 3 -双加氧酶(HPCD) 基因的克隆、鉴定与菌株中基因簇的解析 | 第32-70页 |
| 1. 材料与方法 | 第33-47页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-47页 |
| ·基因组文库的构建 | 第34-37页 |
| ·2 , 3- 二羟基联苯双加氧酶(23DHBD) 基因和3 , 4 - 二羟苯乙酸- 2 ,3-双加氧酶(HPCD) 基因的克隆及过表达载体的构建 | 第37-40页 |
| ·23DHBD 基因在PJ053 基因组DNA 上的定位 | 第40-42页 |
| ·23DHBD 和HPCD 蛋白表达及纯化 | 第42-43页 |
| ·23DHBD 和HPCD 融合蛋白抗体的制备及抗体效价的检测 | 第43-45页 |
| ·23DHBD 和HPCD 蛋白的 Western-blot 检测 | 第45-46页 |
| ·不同菌株中23DHBD 酶活分析 | 第46-47页 |
| 2. 结果 | 第47-66页 |
| ·PJ053 基因组文库的构建 | 第47-53页 |
| ·PJ053 基因组DNA 的不完全酶切条件的优化 | 第47-48页 |
| ·PJ053 基因组DNA 片段与pUC19 的连接、转化与筛选 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·阳性克隆的序列测定 | 第50-53页 |
| ·两株阳性克隆质粒中插入片段的软件分析 | 第53-59页 |
| ·pUCW402 中插入片段的 GenSCAN 软件分析 | 第53页 |
| ·pUCW402 中插入片段的 BLAST 分析 | 第53-56页 |
| ·pUCW331 中插入片段的 GenSCAN 软件分析 | 第56页 |
| ·pUCW331 中插入片段的 BLAST 分析 | 第56-59页 |
| ·23DHBD 基因的多态性分析 | 第59页 |
| ·23DHBD 基因和HP CD 基因的克隆及鉴定 | 第59-61页 |
| ·23DHBD 基因在 PJ053 基因组 DNA 上的定位 | 第59-60页 |
| ·23DHBD 基因和H PCD 基因的PCR 亚克隆 | 第60-61页 |
| ·23DHBD 基因和HP CD 基因在不同菌株中的表达 | 第61-64页 |
| ·23DHBD 基因和H PCD 基因的原核表达 | 第61-62页 |
| ·23DHBD 和 HPCD 的蛋白纯化 | 第62-63页 |
| ·23DHBD 和HPCD 抗体的制备及 ELASE 检测 | 第63页 |
| ·基因工程菌和PJ053中23DHBD 和HPCD 表达情况的Western 检测 | 第63-64页 |
| ·不同菌株中23DHBD 酶活分析 | 第64-66页 |
| ·最适温度和最适pH 的确定 | 第64-65页 |
| ·不同底物条件下酶活的测定 | 第65-66页 |
| 3. 讨论 | 第66-70页 |
| ·PJ053 基因组文库构建 | 第66页 |
| ·23DHBD 和HPCD 的解析 | 第66-67页 |
| ·基因工程菌株与野生菌株比较 | 第67页 |
| ·PJ053 菌株中芳香族化合物降解途径解析 | 第67-70页 |
| 第三章 咔唑降解基因簇中carB 基因的克隆与表达 | 第70-78页 |
| 1. 材料与方法 | 第71-73页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·实验仪器 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72-73页 |
| ·CarB 基因的克隆与鉴定 | 第72-73页 |
| ·BL21(pETW-JS1) 和BL21(pETW-JH2) 蛋白诱导表达 | 第73页 |
| 2. 结果 | 第73-76页 |
| ·咔唑降解途径中carB 基因的克隆及鉴定 | 第73-76页 |
| ·carB 基因序列的序列分析 | 第76页 |
| ·carB 基因的表达 | 第76页 |
| 3. 讨论 | 第76-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 1 .对四个土壤样品的菌种进行富集培养, 筛选到12株咔唑降解菌株 | 第78页 |
| 2 .节杆菌 PJ053 形态 、生长条件及进化分析结果 | 第78页 |
| 3 .构建了节杆菌PJ053基因组文库并获得两株阳性克隆 | 第78页 |
| 4 . 首次在节杆菌 PJ053中发现了23DHBD 基因 | 第78-79页 |
| 5 .亚克隆23 DHBD和 HPCD基因并构建了蛋白高效表达的基因工程菌 | 第79页 |
| 6 .对23DHBD和HPCD进行蛋白表达 、 纯化并制备多克隆抗体 。基因工程菌株与野生型菌株 PJ053表达23DHBD和HPCD蛋白的水平进行了 Western Blotting检 测 | 第79页 |
| 7 .从JS061和JH062菌株中克隆了CarB基 因 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 附录 | 第88-92页 |
| 致 谢 | 第92-93页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第93页 |
