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人乳头瘤病毒58型L1基因在毕赤酵母中的表达及鉴定

内容提要第1-7页
第一章前言第7-30页
   ·人乳头瘤病毒(HPV)简介第7-28页
     ·HPV 的分型第7-8页
     ·人乳头瘤病毒(HPV)的分子生物学特征第8-13页
     ·HPV 的致癌机制第13-14页
     ·HPV 预防性疫苗的研究进展第14-20页
     ·HPV58 与宫颈癌第20-26页
     ·真核表达系统的选择第26-28页
   ·本论文设计的构思第28-30页
     ·实验目的第28-29页
     ·实验思路第29-30页
第二章 实验材料和方法第30-50页
   ·材料、仪器和试剂第30-36页
     ·材料第30-31页
     ·主要仪器第31-32页
     ·常用试剂配置第32-36页
   ·实验方法第36-50页
     ·PCR第36-37页
     ·连接反应第37页
     ·大肠杆菌E.coli 感受态的制备第37-38页
     ·连接产物转化E.coli 感受态细胞第38页
     ·质粒的小量提取(碱裂变法)第38-39页
     ·限制性内切酶作用第39页
     ·质粒的大规模提取第39-40页
     ·IPTG 诱导大肠杆菌预表达第40-41页
     ·IPTG 诱导大肠杆菌大量表达第41页
     ·样品纯化前处理第41-42页
     ·包涵体的镍柱亲和层析第42-43页
     ·毕赤酵母电转化感受态细胞的制备第43页
     ·连接产物电转化酵母感受态细胞第43-44页
     ·酵母基因组的的提取第44-45页
     ·酵母重组子摇瓶筛选第45页
     ·蛋白质分子量检测(SDS-PAGE)第45-46页
     ·5L 发酵罐发酵毕赤酵母第46-48页
     ·蛋白的纯化第48页
     ·Western-Blot第48-50页
第三章 结果与讨论第50-64页
   ·HPV58L1 基因在真核表达系统中的构建与鉴定第50-52页
     ·PCR 体外扩增HPV58L1 基因第50-51页
     ·HPV58 L1 与毕赤酵母表达载体的连接与鉴定第51-52页
   ·HPV58L1 多克隆抗体的制备第52-56页
     ·HPV58 L1 在原核表达系统中的构建与鉴定第52-54页
     ·HPV58L1 蛋白的表达和纯化第54-56页
     ·HPV58 L1 抗体的获得第56页
   ·酵母重组子的获得与筛选第56-61页
     ·HPV58 L1 电转化毕赤酵母第56-59页
     ·摇瓶筛选重组子第59-61页
   ·酵母重组子的表达、纯化与鉴定第61-64页
     ·酵母重组子的5L 发酵罐表达第61页
     ·酵母重组子表达产物的纯化第61-62页
     ·酵母重组子表达产物的鉴定第62-64页
参考文献第64-70页
摘要第70-72页
ABSTRACT第72-74页
致谢第74-75页
导师简介第75-77页
作者简介第77页

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