内容提要 | 第1-7页 |
第一章前言 | 第7-30页 |
·人乳头瘤病毒(HPV)简介 | 第7-28页 |
·HPV 的分型 | 第7-8页 |
·人乳头瘤病毒(HPV)的分子生物学特征 | 第8-13页 |
·HPV 的致癌机制 | 第13-14页 |
·HPV 预防性疫苗的研究进展 | 第14-20页 |
·HPV58 与宫颈癌 | 第20-26页 |
·真核表达系统的选择 | 第26-28页 |
·本论文设计的构思 | 第28-30页 |
·实验目的 | 第28-29页 |
·实验思路 | 第29-30页 |
第二章 实验材料和方法 | 第30-50页 |
·材料、仪器和试剂 | 第30-36页 |
·材料 | 第30-31页 |
·主要仪器 | 第31-32页 |
·常用试剂配置 | 第32-36页 |
·实验方法 | 第36-50页 |
·PCR | 第36-37页 |
·连接反应 | 第37页 |
·大肠杆菌E.coli 感受态的制备 | 第37-38页 |
·连接产物转化E.coli 感受态细胞 | 第38页 |
·质粒的小量提取(碱裂变法) | 第38-39页 |
·限制性内切酶作用 | 第39页 |
·质粒的大规模提取 | 第39-40页 |
·IPTG 诱导大肠杆菌预表达 | 第40-41页 |
·IPTG 诱导大肠杆菌大量表达 | 第41页 |
·样品纯化前处理 | 第41-42页 |
·包涵体的镍柱亲和层析 | 第42-43页 |
·毕赤酵母电转化感受态细胞的制备 | 第43页 |
·连接产物电转化酵母感受态细胞 | 第43-44页 |
·酵母基因组的的提取 | 第44-45页 |
·酵母重组子摇瓶筛选 | 第45页 |
·蛋白质分子量检测(SDS-PAGE) | 第45-46页 |
·5L 发酵罐发酵毕赤酵母 | 第46-48页 |
·蛋白的纯化 | 第48页 |
·Western-Blot | 第48-50页 |
第三章 结果与讨论 | 第50-64页 |
·HPV58L1 基因在真核表达系统中的构建与鉴定 | 第50-52页 |
·PCR 体外扩增HPV58L1 基因 | 第50-51页 |
·HPV58 L1 与毕赤酵母表达载体的连接与鉴定 | 第51-52页 |
·HPV58L1 多克隆抗体的制备 | 第52-56页 |
·HPV58 L1 在原核表达系统中的构建与鉴定 | 第52-54页 |
·HPV58L1 蛋白的表达和纯化 | 第54-56页 |
·HPV58 L1 抗体的获得 | 第56页 |
·酵母重组子的获得与筛选 | 第56-61页 |
·HPV58 L1 电转化毕赤酵母 | 第56-59页 |
·摇瓶筛选重组子 | 第59-61页 |
·酵母重组子的表达、纯化与鉴定 | 第61-64页 |
·酵母重组子的5L 发酵罐表达 | 第61页 |
·酵母重组子表达产物的纯化 | 第61-62页 |
·酵母重组子表达产物的鉴定 | 第62-64页 |
参考文献 | 第64-70页 |
摘要 | 第70-72页 |
ABSTRACT | 第72-74页 |
致谢 | 第74-75页 |
导师简介 | 第75-77页 |
作者简介 | 第77页 |