| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-25页 |
| 1 生物素的概述 | 第10-11页 |
| ·生物素的理化特征 | 第10页 |
| ·生物素营养机制 | 第10-11页 |
| ·生物素的生理功能 | 第11页 |
| 2 生物素合成研究进展 | 第11-17页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统概述 | 第11-12页 |
| ·枯草芽孢杆菌生物素操纵子(bio operon)结构和功能 | 第12-14页 |
| ·提高枯草芽孢杆菌生物素产量的策略 | 第14-17页 |
| ·构建重组菌 | 第14-17页 |
| ·发酵工艺的改良 | 第17页 |
| 3 生物素的应用概况 | 第17-20页 |
| ·生物素在动物生产中的应用 | 第17-19页 |
| ·提高畜禽生产性能 | 第17-18页 |
| ·提高畜禽健康水平 | 第18页 |
| ·提高畜禽繁殖性能 | 第18-19页 |
| ·增强畜禽机体免疫能力 | 第19页 |
| ·小结 | 第19页 |
| ·生物素在核酸探针标记和蛋白质亲和纯化中的应用 | 第19-20页 |
| ·生物素在发酵工业中的应用 | 第20页 |
| 4 庚二酸在枯草芽孢杆菌发酵生产中的应用 | 第20-21页 |
| 5 庚二酸的检测 | 第21-23页 |
| ·气相色谱法检测 | 第21-22页 |
| ·反相高效液相色谱法检测 | 第22-23页 |
| 6 生物素检测方法概述 | 第23-25页 |
| ·微生物测定法 | 第23页 |
| ·生物测定法 | 第23页 |
| ·酶法 | 第23页 |
| ·生化分析法 | 第23-25页 |
| 第二章 试验研究 | 第25-50页 |
| 1 材料与方法 | 第25-35页 |
| ·材料 | 第25-28页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·生化试剂与分子生物学试剂 | 第25-26页 |
| ·实验所需各种酶 | 第26页 |
| ·表达元件、枯草芽孢杆菌bio 基因序列 | 第26页 |
| ·主要试剂盒 | 第26页 |
| ·培养基及溶液 | 第26-27页 |
| ·主要的仪器设备 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-35页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第28页 |
| ·枯草杆菌基因组DNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·DNA 片段的纯化回收 | 第29页 |
| ·酶切体系与连接体系 | 第29-30页 |
| ·PCR 实验所用引物及扩增条件 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| ·枯草杆菌电转化感受态细胞的制备及转化 | 第32页 |
| ·枯草芽孢杆菌化学感受态的制备及转化 | 第32-33页 |
| ·Southern blotting | 第33-35页 |
| ·整合子拷贝数检测 | 第35页 |
| ·庚二酸与生物素的检测 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-47页 |
| ·单交叉整合实验 | 第35-42页 |
| ·单交叉整合载体pLHX8 的构建 | 第35-39页 |
| ·单交叉整合 | 第39页 |
| ·单交叉整合的鉴定 | 第39-41页 |
| ·拷贝数的提高及Southern blotting 检测 | 第41-42页 |
| ·庚二酸的检测 | 第42-45页 |
| ·检测波长的确定 | 第42-43页 |
| ·庚二酸回归方程 | 第43-44页 |
| ·整合菌株庚二酸检测 | 第44-45页 |
| ·葡萄糖对整合重组菌庚二酸产量的影响 | 第45页 |
| ·麦芽糖对整合重组菌庚二酸产量的影响 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| ·单交叉整合 | 第47-48页 |
| ·整合载体 | 第47页 |
| ·电转化与化学转化整合 | 第47-48页 |
| ·拷贝数的扩增 | 第48页 |
| ·整合重组菌中庚二酸的表达 | 第48-49页 |
| ·强启动子P_(glv) 的应用 | 第49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 附录1 | 第59-60页 |
| 附录2 | 第60-61页 |
| 附录3 测序结果 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |