| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| ·疯牛病定义及海绵状脑病的特征 | 第12-13页 |
| ·海绵状脑病病原 | 第13-18页 |
| ·PrP~c的结构特征 | 第13-16页 |
| ·PrP~c编码基因——Prnp | 第13-14页 |
| ·PrP~c的一级结构和翻译后修饰 | 第14-15页 |
| ·PrP~c和PrP~(Sc)空间结构特征及理化特性 | 第15-16页 |
| ·PrP~c的生理功能 | 第16-18页 |
| ·Prnp敲除鼠与PrP~c功能 | 第17页 |
| ·PrP~c抗氧化功能 | 第17-18页 |
| ·PrP~c抗叠朊的神经毒性作用 | 第18页 |
| ·PrP~c其它方面功能 | 第18页 |
| ·叠朊 | 第18-21页 |
| ·叠朊的结构和分布 | 第19页 |
| ·叠朊的功能 | 第19-21页 |
| ·抗海绵状脑病病原的抗体 | 第21-25页 |
| ·抗海绵状脑病病原的多克隆抗体 | 第21-22页 |
| ·抗海绵状脑病病原的单克隆抗体 | 第22-25页 |
| ·抗海绵状脑病病原的单克隆抗体制备 | 第22-24页 |
| ·抗海绵状脑病病原的单克隆抗体应用 | 第24-25页 |
| ·海绵状脑病的诊断 | 第25页 |
| ·海绵状脑病研究引发的启迪 | 第25-26页 |
| ·本工作的目的和主要研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 牛羊人朊蛋白基因PRNP的克降及序列分析 | 第27-36页 |
| 1 引言 | 第27页 |
| 2 材料和方法 | 第27-30页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·研究对象、载体与菌株 | 第27页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·常规溶液和缓冲液 | 第28页 |
| ·引物设计与合成 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-30页 |
| ·外周血液总DNA的提取 | 第29页 |
| ·Prnp的PCR | 第29页 |
| ·Prnp的克隆 | 第29页 |
| ·克隆质粒序列测定 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-34页 |
| ·Prnp的PCR扩增 | 第30页 |
| ·重组克隆质粒的双酶切鉴定 | 第30页 |
| ·测序结果及分析 | 第30-34页 |
| ·核苷酸序列以及推导的氨基酸序列比较 | 第30-31页 |
| ·编码八/九肽重复区的核苷酸比较 | 第31页 |
| ·Prnp基因型初步分析 | 第31页 |
| ·PrP氨基酸序列分析和蛋白质空间结构预测 | 第31-34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| ·基因型与海绵状脑病发生的关系 | 第34页 |
| ·蛋白质构象与致病性的关系 | 第34-35页 |
| 5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 牛羊人成熟朊蛋白在大肠杆菌中的高效表达 | 第36-49页 |
| 1 引言 | 第36页 |
| 2 材料和方法 | 第36-41页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·载体与菌株 | 第36页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第36-37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·仪器 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-41页 |
| ·构建重组表达质粒 | 第37-39页 |
| ·牛、羊和人的mPrP在大肠杆菌中表达 | 第39页 |
| ·亲和层析法纯化mPrP的表达产物 | 第39-40页 |
| ·稀释法复性牛重组mPrP | 第40页 |
| ·重组mPrP的反应原性分析 | 第40-41页 |
| ·重组mPrP的蛋白酶K抗性检测 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-46页 |
| ·牛、羊和人的mPrP编码基因的扩增及阳性克隆株建立 | 第41页 |
| ·牛、羊和人的mPrP编码基因的序列测定 | 第41-44页 |
| ·牛、羊和人的mPrP在大肠杆菌中高效表达、纯化和复性 | 第44-46页 |
| ·牛、羊和人重组mPrP反应原性分析 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| ·牛、羊和人mPrP在大肠杆菌中高效表达 | 第46-47页 |
| ·重组mPrP的二聚体结构分析 | 第47页 |
| ·重组mPrP的反应原性分析 | 第47-48页 |
| ·蛋白酶K抗性分析 | 第48页 |
| 5 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 牛羊人叠朊基因PRND的克隆及序列分析 | 第49-54页 |
| 1 引言 | 第49页 |
| 2 材料和方法 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-52页 |
| ·Prnd的PCR扩增 | 第50页 |
| ·重组克隆质粒的双酶切鉴定 | 第50页 |
| ·测序结果及分析 | 第50-52页 |
| ·核苷酸序列及推导的氨基酸序列比较 | 第50-51页 |
| ·氨基酸序列分析和蛋白质二级结构预测 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 5 小结 | 第53-54页 |
| 第五章 牛羊人成熟叠朊在大肠杆菌中的高效表达 | 第54-60页 |
| 1 引言 | 第54页 |
| 2 材料和方法 | 第54-56页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·载体与菌株 | 第55页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·仪器 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-56页 |
| ·构建重组表达质粒 | 第55-56页 |
| ·牛、羊和人的mDpl在大肠杆菌中表达 | 第56页 |
| ·亲和层析法纯化牛、羊和人的重组mDpl表达产物 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-58页 |
| ·牛、羊和人的mDpl编码基因的扩增及阳性克隆株建立 | 第56页 |
| ·牛、羊和人的mDpl在大肠杆菌中表达 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| ·牛、羊和人成熟Dpl在大肠杆菌中高效表达 | 第58-59页 |
| ·牛、羊和人成熟Dpl二聚体结构 | 第59页 |
| 5 小结 | 第59-60页 |
| 第六章 黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第60-80页 |
| 1 引言 | 第60-61页 |
| 2 材料和方法 | 第61-68页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·实验动物 | 第61页 |
| ·细胞株、载体和质粒 | 第61页 |
| ·ELISA反应试剂 | 第61页 |
| ·细胞培养液配制 | 第61-62页 |
| ·其它试剂 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-68页 |
| ·制备免疫原 | 第62-63页 |
| ·动物免疫 | 第63页 |
| ·细胞融合 | 第63-64页 |
| ·抗体检测 | 第64-65页 |
| ·杂交瘤的克隆化、冻存和稳定性检测 | 第65页 |
| ·单克隆抗体的大量生产 | 第65-66页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第66-68页 |
| ·腹水单抗的初步应用 | 第68页 |
| 3 结果 | 第68-76页 |
| ·免疫原牛重组mPrP表达、纯化和复性 | 第68页 |
| ·确定间接ELISA法的抗原和抗体工作浓度 | 第68页 |
| ·筛选阳性杂交瘤细胞系间接ELISA方法建立 | 第68-69页 |
| ·融合鼠血清和对照鼠血清抗体滴度的确定 | 第68-69页 |
| ·筛选阳性杂交瘤细胞系间接ELISA方法的建立以及判断标准 | 第69页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的建立及稳定性检测 | 第69-71页 |
| ·单抗生物学特性鉴定 | 第71-76页 |
| ·Ig类及亚类的鉴定 | 第71页 |
| ·纯化腹水单抗纯度和浓度测定 | 第71-72页 |
| ·腹水单抗效价和亲和常数的测定 | 第72-73页 |
| ·单抗特异性和交叉反应性的鉴定 | 第73-75页 |
| ·抗原表位的初步鉴定 | 第75-76页 |
| ·腹水单抗的初步应用 | 第76页 |
| 4 讨论 | 第76-79页 |
| 5 小结 | 第79-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 博士后期间主持和参与完成的课题以及发表文章 | 第88-90页 |
| 个人简历 | 第90-91页 |
| 永久通讯地址 | 第91页 |
