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对虾白斑综合症病毒基因组细菌双杂交系统的构建及结构蛋白VP664和VP41A的初步研究

中文摘要第1-11页
英文摘要第11-13页
前言第13-22页
 1 对虾白斑综合症病毒(WSSV)及其结构基因研究第13-19页
   ·对虾白斑综合症病毒研究概况第13-16页
     ·对虾白斑综合症病毒的发现第13页
     ·对虾白斑综合症病症及组织病理学第13页
     ·对虾白斑综合症病毒的形态特征及可能的感染过程第13-14页
     ·对虾白斑综合症病毒的分子生物学研究现状第14-16页
   ·对虾白斑综合症病毒结构蛋白的研究第16-19页
 2 本论文研究的内容和意义第19-22页
第一部分 对虾白斑综合症病毒(WSSV)基因组细菌双杂交系统的构建第22-34页
 1 前言第22-27页
   ·细菌双杂交系统第22页
   ·特点和优点第22-23页
   ·基本原理第23-24页
   ·细菌双杂交系统的发展现状第24-25页
   ·细菌双杂交系统的应用第25-26页
   ·构建WSSV 基因组细菌双杂交系统的意义第26-27页
 2 材料与方法第27-28页
   ·材料第27页
   ·方法第27-28页
     ·WSSV 基因组DNA 随机片段的准备第27页
     ·pBT 及pTRG 诱饵载体的准备第27页
     ·WSSV基因组细菌双杂交pBT-wssv与pTRG-wssv库的构建第27-28页
     ·菌落PCR鉴定插入片段的大小第28页
     ·pBT-wssv与pTRG-wssv共转化第28页
 3 结果第28-32页
   ·WSSV基因组DNA随机片段的准备第28-29页
   ·pBT 及pTRG 诱饵载体的准备第29页
   ·WSSV 基因组细菌双杂交pBT-wssv 与pTRG-wssv 库的构建第29-31页
   ·WSSV 基因组细菌双杂交筛选 WSSV 中有相互作用的蛋白质第31-32页
 4 讨论第32-34页
第二部分 对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白 VP664 的研究鉴定第34-47页
 1 前言第34页
 2 材料与方法第34-40页
   ·材料第34-35页
   ·方法第35-40页
     ·WSSV 完整病毒和核衣壳的制备第35-36页
     ·vp664 的质谱分析第36页
     ·vp664 的生物学信息分析第36页
     ·基因的体外表达和蛋白质纯化第36-38页
     ·多克隆抗体的制备第38-39页
     ·Western blot 分析第39页
     ·免疫共沉淀分析第39-40页
 3 结果第40-45页
   ·vp664 基因及其编码产物的生物学信息分析第40页
   ·pET-His-vp664n 和 pET-His-vp664c 重组表达质粒的构建第40-42页
   ·VP664N,VP664C 在E.coli 中的表达和纯化第42页
   ·Western blot 分析第42-44页
   ·免疫共沉淀分析第44-45页
 4 讨论第45-47页
第三部分 对虾白斑综合症病毒膜蛋白 VP41A 的功能研究第47-57页
 1 前言第47页
 2 材料与方法第47-51页
   ·材料第47页
   ·方法第47-51页
     ·WSSV 完整病毒和核衣壳的制备第47页
     ·VP41A 的质谱分析第47-48页
     ·VP41A 的生物学信息分析第48页
     ·基因的体外表达和蛋白质纯化第48-50页
     ·多克隆抗体的制备第50页
     ·Western blot 分析第50页
     ·从螯虾血细胞裂解液中筛选与VP41A 有相互作用的蛋白质第50-51页
 3 结果第51-55页
   ·vp41a 基因及其编码产物的生物学信息分析第51页
   ·pET-His-vp41a 重组表达质粒的构建第51-52页
   ·VP41A 在E.coli 中的表达和纯化第52-53页
   ·Western blot 分析第53-54页
   ·螯虾血细胞裂解液中筛选与 VP41A 有相互作用的蛋白质第54页
   ·Nano-ESI-MS第54-55页
 4 讨论第55-57页
参考文献第57-68页
缩略词第68-69页
附录第69-80页
致谢第80页

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