| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 前言 | 第17-29页 |
| 1 研究背景 | 第17-27页 |
| ·生长抑素及其类似物 | 第17页 |
| ·生长抑素受体 | 第17-18页 |
| ·生长抑素2型受体与肿瘤 | 第18-19页 |
| ·生长抑素及其类似物治疗肿瘤 | 第19-20页 |
| ·直接抗增殖作用 | 第19页 |
| ·间接抗增殖作用 | 第19-20页 |
| ·基因转移的方法 | 第20-21页 |
| ·基因表达显像 | 第21页 |
| ·放射性核素报告基因显像 | 第21-25页 |
| ·报告基因显像的原理和条件 | 第21-22页 |
| ·报告基因显像的技术和方法 | 第22-23页 |
| ·SSTR2报告基因显像研究现状 | 第23-25页 |
| ·胰腺癌SSTR2的基因治疗 | 第25-27页 |
| 2 研究目的和意义 | 第27页 |
| 3 研究内容 | 第27-28页 |
| ·携带人SSTR2基因的腺病毒载体的构建和表达 | 第27页 |
| ·~(99m)Tc-奥曲肽体内药代动力学及与腺病毒转染后capan-2细胞体外受体结合特性研究 | 第27页 |
| ·SSTR2在胰腺癌中的核素报告基因显像 | 第27页 |
| ·SSTR2对裸鼠人胰腺癌移植瘤抑制作用的研究 | 第27-28页 |
| 4 研究技术路线 | 第28-29页 |
| 第一部分 携带人SSTR2基因的腺病毒载体的构建和表达 | 第29-66页 |
| 1 前言 | 第29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-51页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·质粒、菌株、细胞株 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要溶液配方 | 第31-33页 |
| ·方法 | 第33-51页 |
| ·DH5a大肠细菌感受态的制备 | 第33-34页 |
| ·质粒的转化和扩增 | 第34页 |
| ·质粒的提取和纯化 | 第34-35页 |
| ·转化质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| ·pDC316-SSTR2和pDC316-1acZ重组子的构建 | 第36-39页 |
| ·SSTR2和LacZ基因腺病毒载体重组策略 | 第39页 |
| ·pDC316-SSTR2、pDC316-LacZ、pFG140和pBHGloxdeltaE1,3Cre的转化、提取和鉴定 | 第39-40页 |
| ·293细胞培养 | 第40页 |
| ·位点特异性重组构建SSTR2和LacZ基因腺病毒载体及其鉴定 | 第40-43页 |
| ·重组腺病毒Ad-SSTR2和Ad-LacZ的扩增和保存 | 第43-44页 |
| ·重组腺病毒的纯化 | 第44页 |
| ·重组腺病毒的滴度测定 | 第44-45页 |
| ·胰腺癌细胞capan-2的培养 | 第45页 |
| ·重组腺病毒的感染能力测定 | 第45-46页 |
| ·重组腺病毒Ad-SSTR2在胰腺癌细胞capan-2的表达测定 | 第46-50页 |
| ·重组腺病毒对capan-2细胞增殖的影响 | 第50-51页 |
| ·统计学分析 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-61页 |
| ·腺病毒穿梭质粒载体的构建 | 第51-53页 |
| ·pCMVSPORT6-SSTR2,pSV-β-Gal和pDC316质粒的酶切鉴定结果 | 第51页 |
| ·pDC316-SSTR2、pDC316-LacZ和pBHGloxdeltaE1,3Cre酶切鉴定结果 | 第51-53页 |
| ·腺病毒载体的位置特异性重组 | 第53页 |
| ·脂质体介导腺病毒穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染293细胞 | 第53页 |
| ·重组腺病毒的PCR鉴定 | 第53页 |
| ·重组腺病毒的扩增、纯化和滴度测定 | 第53页 |
| ·重组腺病毒感染能力测定 | 第53-57页 |
| ·Ad-SSTR2在capan-2中的表达 | 第57-60页 |
| ·RT-PCR检测SSTR2 mRNA表达 | 第57页 |
| ·Western blot检测SSTR2蛋白的表达 | 第57-58页 |
| ·免疫细胞化学检测SSTR2蛋白的表达 | 第58-60页 |
| ·重组腺病毒对capan-2细胞增殖的影响 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| ·基因治疗载体的选择 | 第61-62页 |
| ·Ad-SSTR2和Ad-LacZ的构建和鉴定 | 第62页 |
| ·重组腺病毒的感染能力 | 第62-63页 |
| ·Ad-SSTR2在capan-2中的表达 | 第63-64页 |
| ·重组腺病毒对capan-2细胞增殖的影响 | 第64-65页 |
| 5 小结 | 第65-66页 |
| 第二部分 ~(99m)Tc-奥曲肽体内药代动力学及与腺病毒转染后capan-2细胞体外受体结合特性研究 | 第66-78页 |
| 1 前言 | 第66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-70页 |
| ·主要仪器 | 第66-67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·主要溶液配方 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-70页 |
| ·~(99m)Tc-奥曲肽的制备及放化纯度测定 | 第67-68页 |
| ·~(99m)Tc-奥曲肽在大鼠体内的分布和药代动力学分析 | 第68页 |
| ·~(99m)Tc-奥曲肽与重组腺病毒转染后capan-2细胞体外受体结合特性分析 | 第68-70页 |
| 3 结果 | 第70-74页 |
| ·~(99m)Tc-奥曲肽的放化纯 | 第70页 |
| ·~(99m)Tc-奥曲肽在大鼠体内的分布和药物代谢动力学 | 第70-72页 |
| ·重组腺病毒转染后capan-2细胞受体的放射性配基结合实验 | 第72-74页 |
| ·饱和结合实验 | 第72-74页 |
| ·竞争抑制实验 | 第74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| ·~(99m)Tc-奥曲肽在大鼠体内的分布和药代动力学分析 | 第74-75页 |
| ·~(99m)Tc-奥曲肽与Ad-SSTR2转染后capan-2细胞受体结合特性分析 | 第75-76页 |
| 5 小结 | 第76-78页 |
| 第三部分 SSTR2在胰腺癌中的核素报告基因显像 | 第78-96页 |
| 1 前言 | 第78-79页 |
| 2 材料与方法 | 第79-83页 |
| ·主要仪器 | 第79页 |
| ·腺病毒、细胞株 | 第79页 |
| ·主要试剂 | 第79-80页 |
| ·主要溶液配方 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-83页 |
| ·细胞培养 | 第80页 |
| ·细胞株SSTR2表达的检测 | 第80-81页 |
| ·裸鼠胰腺癌模型的制备 | 第81页 |
| ·重组腺病毒Ad-SSTR2和Ad-LacZ转染裸鼠胰腺癌移植瘤 | 第81页 |
| ·Ad-LacZ转染裸鼠胰腺癌移植瘤后β半乳糖苷酶蛋白的检测 | 第81页 |
| ·Ad-SSTR2转染裸鼠胰腺癌移植瘤后SSTR2蛋白的检测 | 第81-82页 |
| ·转染后荷胰腺癌裸鼠生长抑素2型受体显像 | 第82-83页 |
| ·~(99m)Tc-奥曲肽在荷胰腺癌裸鼠体内的生物学分布 | 第83页 |
| ·统计学分析 | 第83页 |
| 3 结果 | 第83-90页 |
| ·细胞株SSTR2表达的检测 | 第83-84页 |
| ·细胞株SSTR2 mRNA表达的检测 | 第83-84页 |
| ·细胞株SSTR2蛋白表达的检测 | 第84页 |
| ·Ad-LacZ转染裸鼠胰腺癌移植瘤后β半乳糖苷酶蛋白的检测 | 第84页 |
| ·Ad-SSTR2转染裸鼠胰腺癌移植瘤后SSTR2蛋白的检测 | 第84-87页 |
| ·免疫组织化学 | 第84-85页 |
| ·Western blot | 第85-87页 |
| ·转染后荷胰腺癌裸鼠生长抑素2型受体显像 | 第87页 |
| ·~(99m)Tc-奥曲肽在荷胰腺癌裸鼠体内的生物学分布 | 第87-90页 |
| 4 讨论 | 第90-95页 |
| ·多数肿瘤表达SSTR2 | 第90-91页 |
| ·胰腺癌能进行SSTR2核素报告基因显像 | 第91-95页 |
| 5 小结 | 第95-96页 |
| 第四部分 SSTR2对裸鼠人胰腺癌移植瘤抑制作用的研究 | 第96-119页 |
| 1 前言 | 第96页 |
| 2 材料与方法 | 第96-100页 |
| ·主要仪器 | 第97页 |
| ·主要试剂 | 第97页 |
| ·主要溶液配方 | 第97页 |
| ·方法 | 第97-100页 |
| ·裸鼠胰腺癌模型的制备 | 第97-98页 |
| ·Ad-SSTR2和Ad-LacZ转染裸鼠胰腺癌移植瘤后抑瘤效果观察 | 第98页 |
| ·肿瘤组织苏木素-伊红(HE)染色 | 第98页 |
| ·肿瘤组织周期检测 | 第98-99页 |
| ·Western blot检测p16、p21、Bax、Bcl-2、caspase-3、p53、survivin、ERK2、ras、VEGF、TIMP-2和PARP-1的蛋白表达水平 | 第99-100页 |
| 3 结果 | 第100-112页 |
| ·Ad-SSTR2对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的抑制作用 | 第100-102页 |
| ·HE染色结果 | 第102页 |
| ·肿瘤组织周期检测结果 | 第102-105页 |
| ·Western blot结果 | 第105-112页 |
| ·Ad-SSTR2在裸鼠肿瘤组织中的表达 | 第105页 |
| ·Ad-SSTR2对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的抑制作用的可能机制 | 第105-112页 |
| 4 讨论 | 第112-117页 |
| ·SSTR2抑制胰腺癌的生长 | 第112-113页 |
| ·SSTR2通过G_0/G_1期阻滞抑制胰腺癌生长 | 第113-114页 |
| ·SSTR2通过影响Ras-Raf-MEK-ERK信号转导通路抑制胰腺癌生长 | 第114-115页 |
| ·SSTR2通过影响肿瘤血管生成抑制胰腺癌生长 | 第115-116页 |
| ·SSTR2通过诱导细胞凋亡抑制胰腺癌生长 | 第116-117页 |
| 5 小结 | 第117-119页 |
| 结论 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-129页 |
| 附录 | 第129-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 在校期间发表论文 | 第137页 |
