| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 第一部分 卵巢癌HE4基因重组表达质粒的构建及鉴定 | 第18-33页 |
| 1. 材料 | 第18-20页 |
| 2. 实验方法 | 第20-25页 |
| ·卵巢癌细胞的复苏和培养 | 第20页 |
| ·细胞的准备 | 第20页 |
| ·用Trizol提取细胞总RNA | 第20-21页 |
| ·RT-PCR提取HE4基因 | 第21-22页 |
| ·HE4基因的TA克隆 | 第22-23页 |
| ·目的基因片段的分离和回收 | 第22页 |
| ·目的基因片段与载体的TA克隆 | 第22页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·转化 | 第22页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第22-23页 |
| ·HE4目的基因的酶切、纯化 | 第23页 |
| ·HE4基因序列测定及分析 | 第23页 |
| ·重组克隆的筛选及鉴定 | 第23-25页 |
| ·目的基因的连接、转化 | 第24页 |
| ·初步鉴定 | 第24页 |
| ·酶切鉴定 | 第24-25页 |
| 3. 结果 | 第25-31页 |
| ·总RNA的提取 | 第25页 |
| ·重组克隆的筛选及鉴定 | 第25-26页 |
| ·序列的测定及分析 | 第26-31页 |
| 4. 讨论 | 第31-32页 |
| 5. 小结 | 第32-33页 |
| 第二部分 重组蛋白的表达、纯化及免疫原性研究 | 第33-48页 |
| 1. 材料 | 第33-35页 |
| 2. 实验方法 | 第35-38页 |
| ·HE4基因的诱导表达 | 第35页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第35页 |
| ·包涵体的纯化 | 第35-36页 |
| ·包涵体的复性 | 第36页 |
| ·表达产物抗原性分析 | 第36-38页 |
| ·免疫血清的制备 | 第36页 |
| ·Western-blot | 第36-38页 |
| 3. 结果 | 第38-44页 |
| ·重组质粒的表达 | 第38页 |
| ·表达条件的优化 | 第38-41页 |
| ·诱导温度 | 第38-39页 |
| ·诱导时机 | 第39-40页 |
| ·诱导时间 | 第40-41页 |
| ·包涵体的纯化 | 第41-42页 |
| ·表达产物免疫学鉴定 | 第42-44页 |
| 4. 讨论 | 第44-47页 |
| 5. 小结 | 第47-48页 |
| 第三部分 单克隆抗体的制备及鉴定 | 第48-59页 |
| 1. 材料 | 第48-50页 |
| 2. 实验方法 | 第50-53页 |
| ·抗原制备 | 第50页 |
| ·动物免疫 | 第50页 |
| ·细胞融合 | 第50-51页 |
| ·阳性克隆的筛选与克隆化 | 第51页 |
| ·单克隆抗体的Ig类与亚类鉴定 | 第51页 |
| ·效价测定 | 第51页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第51-53页 |
| ·ELISA | 第51页 |
| ·Dot-ELISA | 第51-52页 |
| ·Western-blot | 第52-53页 |
| 3. 结果 | 第53-56页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第53页 |
| ·单克隆抗体的类及亚类 | 第53页 |
| ·单克隆抗体的效价 | 第53页 |
| ·单克隆抗的Dot-ELISA鉴定 | 第53-54页 |
| ·单克隆抗体的Western-blot鉴定 | 第54-56页 |
| 4. 讨论 | 第56-57页 |
| 5. 小结 | 第57-58页 |
| 6. 总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-67页 |
| 缩略词 | 第67-68页 |
| 第一军医大学学位论文原创性声明 | 第68页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第68页 |